鴨病毒性腸炎（DVE），又名鴨瘟（DP）是由鴨病毒性腸炎病毒（DEV）引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。傳播迅速，發(fā)病率和死亡率都很高，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在鴨病毒性腸炎的免疫預(yù)防工作中，接種了鴨病毒性腸炎疫苗后，由于多種因素可能導(dǎo)致免疫鴨不產(chǎn)生或產(chǎn)生低水平鴨病毒性腸炎病毒抗體。

gB蛋白是病毒的囊膜蛋白，具有吸附、穿入、融合細(xì)胞以及細(xì)胞間傳播功能，具有良好的反應(yīng)原性及免疫原性，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測鴨血清中抗鴨病毒性腸炎病毒gB蛋白抗體IgG。用于免疫鴨病毒性腸炎疫苗后的抗體動態(tài)水平監(jiān)測，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，評估鴨病毒性腸炎免疫狀況，也可用于該病的流行病學(xué)調(diào)查。

【產(chǎn)品內(nèi)容】

【成分性狀】

【用法與判定】

1、需要自備的器材

1.1微量移液器；

1.2 微量移液器配套使用的槍頭；

1.3 用來稀釋洗滌液的500ml量筒；

1.4 適用于檢測96T微孔板的酶標(biāo)儀；

1.5 用于稀釋樣品的1.5ml Ep管；

1.6 蒸餾水或去離子水。

2、樣品的制備

用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋（建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中），樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽性對照。

3、操作步驟 （﹡使用前應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或震蕩予以混勻，所有試劑應(yīng)恢復(fù)至室溫）

3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照；

3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照；

3.3  取100μl經(jīng)1：100稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中，并做好記錄；

3.4  37℃孵育1h；

3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)5次，每次30s；

﹡加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結(jié)果，盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈；

3.6  每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；

3.7  37℃孵育1h；重復(fù)步驟3.5；

3.8  每孔加100μl底物液；

3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；

3.10 每孔加100μl的終止液；

3.11 立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值，即OD₄₅₀值。

4、試驗(yàn)有效性判斷

4.1陰性對照：正常情況下，陰性對照孔OD₄₅₀值≤0.2；

4.2陽性對照：正常情況下，陽性對照孔OD₄₅₀值≥0.4；

4.3臨界值(C.O.)計算：臨界值=0.2+陰性對照均值；陰性對照OD₄₅₀值大于0.2時應(yīng)舍棄，如所有陰性對照OD₄₅₀值均大于0.2時須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對照低于0.05時以0.05計算。

4.4結(jié)果判定： 檢測樣品OD₄₅₀值≥臨界值，判定該檢測樣品為陽性； 檢測樣品OD₄₅₀值＜臨界值，判定該檢測樣品為陰性。

【注意事項(xiàng)】

（1）待檢血清樣品數(shù)量過多時，應(yīng)先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統(tǒng)一將血清樣品加入酶標(biāo)板中，使反應(yīng)時間一致。

（2）試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。

（3）底物液和終止液對皮膚有刺激性，注意防護(hù)。

（4）底物液不要暴露于強(qiáng)光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。

（5）所有試劑應(yīng)在2～8℃存放；使用前恢復(fù)到室溫，使用后放回2～8℃。

（6）注意防止試劑盒組分受到污染。

（7）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。

（8）操作過程中的移液、時間和洗滌必須精確。

【規(guī)格與包裝】96T×2

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為6個月

僅供獸醫(yī)診斷使用