低豐度蛋白,盡管稀少,卻常常帶有重要信息。在疾病治療方面,它們往往充當了診斷、預后和治療效果的標記物,也可能是治療的靶點。在蛋白質(zhì)組學分析方面,研究者也希望能獲得復雜樣品中低豐度蛋白,從中找到具有特殊作用的成員。然而,猶如大海撈針一般,它們卻并不好找。近年來,研究人員正不斷提出新的方法和技術,從生物樣品中挑出低豐度蛋白,以便確切地了解它們是什么,以及它們意味著什么。
血漿的低豐度蛋白越來越成為科學研究的熱點,越來越多的證據(jù)也表明,血漿的很多低豐度蛋白是十分重要的疾病標記物,其表達的異常,與疾病的發(fā)展密切。2-DE(雙向電泳)是分離不同分子量和PI值蛋白的有效方法,但由于大量的低豐度蛋白往往與高豐度的蛋白結合在一起,大體積復雜樣品的雙向電泳的效果并不理想。
許多研究人在竭盡全力的在尋找更多的辦法得到這些低豐度的蛋白。但試想一下,這些低豐度的蛋白被高豐度蛋白結合或是掩蓋,工作的難度可想而知。澳大利亞MinomicAnna Fitzgerald決定利用MF-10 Gradiflow系統(tǒng) (現(xiàn)稱 ProteomeSep, 由澳大利亞NuSep公司所生產(chǎn)),來分離血漿中的蛋白,通過一步初步的分離,然后將樣品再通過2-DE分離,希望獲得較理想的分離結果。
MF-10 Gradiflow系統(tǒng)可以通過不同的蛋白分子量和PI值將樣品中的區(qū)別,方便快捷的分離復雜樣品的蛋白。由于樣品在分離時,不需要變性處理,因此MF-10分離的樣品保存著原本的活性。
通過分子量分離。分離柱的兩側是兩個5kDa的NMWCO膜,中間放置了1000, 500, 150, 65 and 45 kDa 的NMWCO膜,從而將柱分為6個槽室。在陰極點樣品,加一定電壓,不同大小范圍的蛋白將被分離在不同的槽室。
通過蛋白PI值分離。將5個1000kDa的NMWCO膜放置在柱中間,將柱分為6個槽室。每個槽室點樣品,加電壓,樣品將按照PI值分開。
Anna Fitzgerald利用MF-10分離血漿樣品,獲得比較理想的結果。而研究者所做的就是簡單的兩步電泳。但大大降低了高豐度蛋白在樣品中的比重,使得分離難度大大降低。
MF-10 Gradiflow系統(tǒng)很好的解決了復雜樣品中低豐度蛋白難以分離的問題,方便快捷的操作,不僅可以用于血漿中蛋白質(zhì)組學的研究,腦脊液、尿液等的分析中也有著廣泛的應用。
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