植物細(xì)胞培養(yǎng)具有周期長(zhǎng)、細(xì)胞抗剪切能力弱、易團(tuán)聚等特點(diǎn)。同時(shí),植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)的目的是生產(chǎn)天然產(chǎn)物,而這些天然產(chǎn)物均為細(xì)胞次生代謝物。所以,植物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器的設(shè)計(jì),不僅要考慮有利于細(xì)胞生長(zhǎng),同時(shí)還要考慮有利于產(chǎn)物的積累和分離?傮w上講,適合植物細(xì)胞的反應(yīng)器應(yīng)該具有適宜的氧傳遞、良好的流動(dòng)性和較低的剪切力。根據(jù)不同植物細(xì)胞生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物積累的特點(diǎn),目前已研究設(shè)計(jì)出多種類(lèi)型的反應(yīng)器用于植物細(xì)胞培養(yǎng)。
一、懸浮培養(yǎng)生物反應(yīng)器
1機(jī)械攪拌生物反應(yīng)器
盡管機(jī)械攪拌反應(yīng)器已成功用于許多細(xì)胞的培養(yǎng)中,反應(yīng)器內(nèi)的溫度、pH、溶氧及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度較其他反應(yīng)器更易控制等優(yōu)點(diǎn),但由于機(jī)械攪拌造成的剪切力對(duì)植物細(xì)胞造成較大的損傷,對(duì)次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成也會(huì)產(chǎn)生影響,同時(shí)會(huì)帶來(lái)染菌和機(jī)械上的問(wèn)題,因此需篩選出抗剪切力的細(xì)胞系,也可對(duì)反應(yīng)器結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造,尤其是攪拌槳的結(jié)構(gòu)和類(lèi)型的改進(jìn),使其具有緩和、充分的攪拌效果。
2非機(jī)械攪拌式反應(yīng)器
植物細(xì)胞的培養(yǎng)比較多地采用各種非機(jī)械攪拌生物反應(yīng)器,其中常用的是氣體攪拌生物反應(yīng)器。氣體攪拌生物反應(yīng)器沒(méi)有活動(dòng)的攪拌裝置,在很大程度上減少了剪切力,并能在長(zhǎng)期操作中保持無(wú)菌。氣體攪拌生物反應(yīng)器包括鼓泡塔和氣升反應(yīng)器等。氣體攪拌生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,氧傳遞效率高,剪切力低,對(duì)細(xì)胞的損傷小,容易實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期無(wú)菌培養(yǎng),較適用于植物細(xì)胞培養(yǎng)。
缺點(diǎn):操作彈性小,低氣速時(shí)尤其在培養(yǎng)后期細(xì)胞密度較高時(shí),混合效果較差。如果提高通氣量,又會(huì)產(chǎn)生大量泡沫,也易于驅(qū)除培養(yǎng)液中的二氧化碳和乙烯,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有阻礙作用。過(guò)高的溶氧對(duì)植物細(xì)胞合成次級(jí)代謝產(chǎn)物不利。
二、固定化細(xì)胞生物反應(yīng)器
1填充床生物反應(yīng)器
細(xì)胞可以位于支撐物表面,也可包埋于支撐物之中,培養(yǎng)液流經(jīng)支撐物顆粒,不斷被細(xì)胞利用。優(yōu)點(diǎn):?jiǎn)挝惑w積固定細(xì)胞量大。缺點(diǎn):混合效果低,對(duì)必要的氧傳遞、pH、溫度控制和氣體產(chǎn)物的排除造成困難,影響細(xì)胞的培養(yǎng)。
2流化床生物反應(yīng)器
利用液體的能量來(lái)懸浮顆粒。顆粒呈流化狀態(tài)所需的能量與顆粒大小成正比,因此常采用小固定化顆粒,這些小顆粒良好的傳質(zhì)特性是流化床反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn),缺點(diǎn):剪切力和顆粒碰撞會(huì)損壞固定化細(xì)胞。
3膜生物反應(yīng)器
采用具有一定孔徑和選擇透性的膜固定植物細(xì)胞。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)膜滲透到細(xì)胞中,細(xì)胞產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物通過(guò)膜釋放到培養(yǎng)液中。主要有:中空纖維反應(yīng)器和螺線式卷繞反應(yīng)器,優(yōu)點(diǎn):可以重復(fù)使用。
三、植物細(xì)胞反應(yīng)器的選擇和設(shè)計(jì)
植物細(xì)胞反應(yīng)器的選擇和設(shè)計(jì)需注意:
1氧的供給對(duì)于間歇培養(yǎng),體積溶氧系數(shù)klα需要10-15h-1;
2剪切力反應(yīng)器的剪切力盡可能;
3細(xì)胞的黏附細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程容易黏附在反應(yīng)器壁上,并產(chǎn)生大量的泡沫,導(dǎo)致細(xì)胞量和代謝產(chǎn)物減少,嚴(yán)重時(shí)培養(yǎng)過(guò)程被迫中止;
4細(xì)胞高密度培養(yǎng)時(shí),混合情況變差,培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧的供給不足,細(xì)胞收率下降;
5溫度、pH、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度須控制在合適的范圍內(nèi)。