光是電磁波，波長(zhǎng)100nm～400nm稱(chēng)為紫外光， 400nm～780nm之間的光可被人眼觀察到，大子780nm稱(chēng)為紅外光。人們只所以能夠看到色彩，是因?yàn)楣庹丈涞轿矬w上被物體反射回來(lái)。綠色植物之所以是綠色，是因?yàn)橹参镂�收了光中的紅色光譜。酶標(biāo)儀測(cè)定的原理是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。
　　檢測(cè)單位：
　　光通過(guò)被檢測(cè)物，前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量，特定波長(zhǎng)下，同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。
　　檢測(cè)單位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的縮寫(xiě)，表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度，Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。
　　OD值由下述公式計(jì)算：
　　E＝OD=C×D×E
　　C為檢測(cè)物的濃度
　　D為檢測(cè)物的厚度
　　E為摩爾因子
　　在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng)，在此波長(zhǎng)下，此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段，就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此，在測(cè)定檢測(cè)物時(shí)，我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，稱(chēng)為測(cè)量波長(zhǎng)。
　　但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng)，以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下，檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。
　　Anthos 酶標(biāo)儀檢測(cè)值計(jì)算
　　儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量，轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào)，最大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0％，沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100％。則實(shí)際檢測(cè)中，檢測(cè)物的透光值均在 0％一100％之間。透光值
的計(jì)算如下：
　　T＝（Meas—Min）／（Max—Min）
　　其中T為透光值， Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Min為在 0％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值， Max為在100％的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值，舉例如下：
　　MaX=3600 Mn=20 Meas＝30
　　T=（30-20）/3600-20)＝0．0028
　　OD＝1og（1/T）=1og（1/0.0028）=2.552
　　Anthos 酶標(biāo)儀的中心定位
　　儀器會(huì)自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)孔進(jìn)行中心定位，中心定位是要消除酶標(biāo)孔底的凸凹引起的厚薄不均帶來(lái)檢測(cè)的不準(zhǔn)確。在對(duì)每一個(gè)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，儀器其實(shí)要進(jìn)行35個(gè)點(diǎn)的測(cè)量，選取最中間的5個(gè)點(diǎn)的均值為本孔的OD值。
　　光源的參照通道
　　參照通道是用來(lái)校準(zhǔn)由于電壓不穩(wěn)或燈泡磨損帶來(lái)的影響。
　　酶標(biāo)儀的用途和其它提示
　　用于ELISA試劑的測(cè)定，廣泛用于各種實(shí)驗(yàn)室，包括臨床實(shí)驗(yàn)室。
　　質(zhì)量控制
　　質(zhì)量控制是試劑檢測(cè)的重要因素。請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行質(zhì)量控制。
　　空白校正
　　有一些試劑盒的說(shuō)陰書(shū)將空白孔設(shè)置為空氣，其它大多數(shù)空白孔的設(shè)置是用試劑來(lái)設(shè)置的，請(qǐng)按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。
　　檢測(cè)結(jié)果的解釋
　　由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測(cè)的結(jié)果，如不同的酶標(biāo)板，檢測(cè)試劑的體積，都會(huì)造成OD值的不，因此，只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測(cè)結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)
1、工作環(huán)境
　　酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長(zhǎng)其使用壽命。根據(jù)DIN VDE 0871條例，儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN 45 635 －19條例：
　　儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。
　　為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽(yáng)光直射。
　　操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間。
　　操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。
　　操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。
　　保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，以及足夠的操作空間。
2、操作注意事項(xiàng)
　　酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用必須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果，操作過(guò)程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣，會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：
　　使用加液器加液，加液頭不能混用。
　　洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。
　　嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。
　　在測(cè)量過(guò)程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以防酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。
　　請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。
　　如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試
　　劑盒的操作說(shuō)明，以防對(duì)操作人員造成損害。
　　如果儀器接觸過(guò)污染性或傳染性物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和消毒。
　　不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。
　　對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以達(dá)到最佳效果。
　　使用后蓋好防塵罩。
　　出現(xiàn)技術(shù)故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。

酶標(biāo)儀及洗板機(jī)選購(gòu)指南
　　酶標(biāo)儀（Microplate Reader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專(zhuān)業(yè)儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)抗體或抗原的濃度。
　　酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，特別在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，同時(shí)促進(jìn)了生殖健康技術(shù)水平提高 。
　　目前國(guó)內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開(kāi)展了酶免檢測(cè)項(xiàng)目，如：乙肝五項(xiàng)、愛(ài)滋病檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu) 育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法，報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對(duì)照品的 OD 值×2.5，通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否超過(guò)臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否超過(guò)另一孔顏色的2.5倍就不可能。
　　國(guó)內(nèi)多家權(quán)威機(jī)構(gòu)，如衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說(shuō)明書(shū)沒(méi)有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶免檢測(cè)的 項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變（如：肝炎、愛(ài)滋病、優(yōu)生優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院手術(shù)病人術(shù)前的丙肝、愛(ài)滋等 EIA 試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的醫(yī)療事故糾紛的必要手段，正逐漸被許多單位所采用。
　　我國(guó)免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場(chǎng)上的情況如下：
　　　　　　　　方法　　所處市場(chǎng)周期
　　　　　　　　放免　　衰退期
　　　　　　　　酶免　　成長(zhǎng)期
　　　　　　　　發(fā)光　　進(jìn)入期
　　放免技術(shù)由于試劑的污染和有效期等問(wèn)題在國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)逐漸被淘汰，而化學(xué)發(fā)光試劑和設(shè)備比較昂貴，使得其在國(guó)內(nèi)的普及特別在計(jì)生系統(tǒng)普及需要較長(zhǎng)時(shí)間，EIA 技術(shù)穩(wěn)定，試劑價(jià)格合理，供應(yīng)充，酶免技術(shù)在中國(guó)市場(chǎng)處于成長(zhǎng)期，因此購(gòu)買(mǎi)酶標(biāo)儀正合適宜。
　　尤其要提到的是，在中國(guó)的計(jì)劃生育和婦幼保健系統(tǒng)配備酶標(biāo)儀已經(jīng)迫在眉睫。早在幾年以前, 世界衛(wèi)生組織已建議對(duì)孕婦進(jìn)行 TORCH五項(xiàng)常規(guī)篩查，但是遺憾的是由于缺乏酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等設(shè)備，RCH的檢測(cè)在中國(guó)還未能普遍開(kāi)展。TORCH 感染在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中稱(chēng)為T(mén)ORCH綜合癥，由于孕婦, 胎兒和新生兒都易被感染, 它已受到全世界婦產(chǎn)科和兒科的極大重視。妊娠期感染不僅危害母體，往往還可對(duì)胎兒和新生兒產(chǎn)生嚴(yán)重影響。通過(guò)胎盤(pán)可引起子宮內(nèi)感染而導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或胎兒生長(zhǎng)遲緩和畸形，通過(guò)產(chǎn)道和母乳可引起新生兒感染。如累及神經(jīng)系統(tǒng)可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰、失明等嚴(yán)重后遺癥，影響人口素質(zhì)，因而 TORCH 感染與優(yōu)生優(yōu)育有極為重要的關(guān)系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱(chēng)為優(yōu)生優(yōu)育十項(xiàng)檢查。目前，TORCH的檢測(cè)方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要特殊儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，簡(jiǎn)單快速，成本低等優(yōu)點(diǎn)，只要配備有酶標(biāo)儀和其他相應(yīng)的設(shè)備 ，多數(shù)普通實(shí)驗(yàn)室均可方便地開(kāi)展 。 很顯然, 盡快在計(jì)生系統(tǒng)普及酶標(biāo)儀等設(shè)備是一個(gè)迫切的需求。
　　這項(xiàng)工作的落實(shí)將有助于提高診治水平，降低母嬰發(fā)病率，從而提高整個(gè)國(guó)民的健康素質(zhì)。目前市場(chǎng)上提供的EIA試劑越來(lái)越多，如：T3、T4、TSH、TORCH 系列、不孕系列、各種癌癥標(biāo)志物、傷寒、副傷寒等，另外通過(guò)母嬰傳播的性傳播疾病(如淋病、梅毒、HIV)和肝炎（如HBV、HCV)，以及胎兒的抗體，新生兒TSH的測(cè)定，疫苗反應(yīng)等，市場(chǎng)上也都有成套 EIA 試劑盒供應(yīng)。使用酶標(biāo)儀有利于拓展檢測(cè)項(xiàng)目，提高檢測(cè)水平，其社會(huì)效益和 經(jīng)濟(jì)效益并舉。