DHPLC法
特點(diǎn):
Ø 擁有高端變性高壓液相色譜儀(WAVE 3500HT)等儀器設(shè)備,配備有國內(nèi)領(lǐng)先和國際一流水平的研究隊(duì)伍。
Ø 采用DNA樣品池法(將若干份PCR樣品混合在一起),使得純合突變也能以雜合子形式得以撿出,極大提高了尋找未知SNPs的效率。
Ø 具有高通量檢測、自動化程度高、靈敏度和特異性較高、檢測DNA片段和長度變動范圍廣、相對價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)
Ø 檢測所需的樣品量很少,PCR產(chǎn)物高于80ng就能滿足實(shí)驗(yàn)要求,且無需純化,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好
Ø 上機(jī)時(shí)間短,只需5~6min就可得出數(shù)據(jù)
Ø 根據(jù)峰圖可判斷是否有突變,但不能確定SNP的位置和類型,需用標(biāo)準(zhǔn)樣品或結(jié)合測序驗(yàn)證
原理:
DHPLC基因突變篩查,就是利用離子對反向液相色譜技術(shù),通過獨(dú)特的DNA分離基質(zhì),對特定的PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分離。含有突變位點(diǎn)的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)變性、逐步降溫退火后,將形成同源和異源雙鏈(一條為突變鏈,另一條為正常鏈)兩種DNA分子.在部分變性條件下,發(fā)生錯配的異源雙鏈DNA更易于解鏈為單鏈DNA,與DNAsep柱結(jié)合力降低,比同源雙鏈DNA分子更易于被乙腈洗脫下來,從而與同源雙鏈DNA分離.一般來說,含變異成分的PCR產(chǎn)物將在DHPLC圖譜上比PCR非變異產(chǎn)物多1-2個峰型,因而兩者可以被鑒別.
實(shí)驗(yàn)流程: Ø DNA提取,設(shè)計(jì)引物并合成
Ø PCR
Ø 上機(jī)檢測,數(shù)據(jù)采集以及分析
客戶提供:
Ø 準(zhǔn)確的基因名稱和序列以及SNP位點(diǎn)信息
Ø A、組織或血液樣品B、基因組DNA 樣品,需-20度保存和運(yùn)輸
Ø 純度要求:OD260/280在1.6~1.8之間;OD260/230在1.8~2.2之間
Ø 濃度要求( C) :基因組DNA濃度大于100ng/µl
Ø DNA用量需求( UL):PCR反應(yīng)個數(shù)(N)* (M)/ (C)
Ø 單個PCR反應(yīng)量(M):50ng
Ø PCR產(chǎn)物大小在150~800bp之間,最好在300bp左右,里面不含礦物油、甲酰胺、高壓滅菌水、蛋白酶 K、牛血清白蛋白
Ø 為了提高 PCR 擴(kuò)增的保真性,最好選用 Pfu DNA 聚合酶
提供結(jié)果: Ø 提供每個PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖片
Ø 提供電子版結(jié)果及實(shí)驗(yàn)流程
Ø 提供數(shù)據(jù)分析服務(wù)
Ø 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及實(shí)驗(yàn)剩余的樣品和引物為客戶所有
收費(fèi)構(gòu)成(具體價(jià)格請咨詢)
Ø DNA提取費(fèi)用
Ø 引物設(shè)計(jì)及合成費(fèi)用
Ø PCR擴(kuò)增費(fèi)用
Ø 上機(jī)費(fèi)用
Ø 數(shù)據(jù)分析費(fèi)用
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