外泌體（Exosomes）是大小為30-150nm，具有磷脂雙分子層膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡。外泌體可攜帶豐富的RNAs、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等生物活性分子，參與細胞間的通訊與調(diào)控。從外泌體研究專業(yè)數(shù)據(jù)庫——ExoCarta和Vesiclepedia中記錄的數(shù)據(jù)可以看出，外泌體攜帶的蛋白質(zhì)的豐富程度尤為突出。外泌體蛋攜帶的蛋白質(zhì)是外泌體標志物、外泌體載藥、外泌體分子機制研究的主要分子抓手。

 

 

      外泌體蛋白質(zhì)也是登錄CNS正刊最多的研究對象。除此之外，外泌體蛋白尤其是膜蛋白具有非常重要的臨床轉(zhuǎn)化價值，也是臨床轉(zhuǎn)化研究中的新寵。組織外泌體與血漿外泌體比對分析也成為發(fā)現(xiàn)新型疾病標志物的經(jīng)典實驗方案。

      在外泌體蛋白標志物相關(guān)研究中，血漿/血清樣本是主要研究載體。然而，血漿/血清中含有大量的載脂蛋白，如高密度脂蛋白質(zhì)HDL，低密度脂蛋白質(zhì)LDL，極低密度脂蛋白VLDL，乳糜微粒CM等。外泌體與這些脂蛋白質(zhì)在物化性質(zhì)上具有較大的相似性。常規(guī)的外泌體分離方法，如超速離心和沉淀法等都無法有效去除血漿/血清中的脂蛋白，嚴重干擾了下游質(zhì)譜實驗數(shù)據(jù)的檢出率和可靠性。同時，實驗樣本來之不易，如何盡可能利用更少的樣本獲得更可靠的實驗數(shù)據(jù)，成為外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究科研群體共同面對的技術(shù)問題。

|   外泌體蛋白質(zhì)組服務(wù)

       華盈生物開發(fā)了一套完整的外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)服務(wù)體系，針對不同類型的樣本分別采用專屬的外泌體提取方法，如超速離心、尺寸排阻、密度梯度離心等。同時，對蛋白質(zhì)組學(xué)實驗前處理進行了系統(tǒng)性創(chuàng)新優(yōu)化，將樣本用量降低的同時獲取高質(zhì)量數(shù)據(jù)，如利用0.5mL血漿即可完成外泌體的分離與蛋白質(zhì)組篩選工作。

       在樣本使用量和檢出蛋白數(shù)上，華盈生物的技術(shù)平臺不斷沖擊外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測的上限。例如：在人外泌體血漿蛋白組鑒定歷史記錄已達到2336種蛋白質(zhì)，并且這個數(shù)據(jù)記錄每天都可能被再次突破。截止目前，華盈生物已經(jīng)完成超過30種樣品類型的樣品外泌體制備與分析。對于特殊樣本如：胃液、腦積液、腦脊液、膽汁、微生物培養(yǎng)液、植物培養(yǎng)液等，也累積了豐富的項目經(jīng)驗，可承接復(fù)雜樣品和項目的研究服務(wù)需求。

       對于外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)研究來說，外泌體的純度至關(guān)重要。在組織外泌體等熱點研究領(lǐng)域，華盈生物經(jīng)過系統(tǒng)的研發(fā)和比對分析，開發(fā)出的組織外泌體分離純化方法可顯著提高外泌體的純度，達到Top雜志的要求。

        華盈生物擁有質(zhì)譜技術(shù)和抗體芯片兩大平臺，針對不同的研究需求，選擇更優(yōu)的技術(shù)。質(zhì)譜技術(shù)對于鑒定能夠在外泌體中攜帶的新蛋白（尤其是膜蛋白）具有顯著優(yōu)勢，而抗體芯片則利用抗原抗體反應(yīng)的特異性原理，對于外泌體中攜帶的分泌型的蛋白的鑒定更加靈敏和準確（抗體芯片目前可檢測超過500種分泌蛋白）。

|   經(jīng)典案例：血漿外泌體S100-A9蛋白激活NF-κB促進淋巴瘤復(fù)發(fā)

血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物，也可以進行機理研究？

       首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個亞組：疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白質(zhì)組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達，可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步，研究人員通過生信分析發(fā)現(xiàn)進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中，證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進一步激活NF-κB通路。

      該研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不僅找到輔助診斷進展期CLL的標志物，并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調(diào)控，不斷激活進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路，促進CLL進展的特殊機理。

|   客戶文獻

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