AQUA絕對定量分析是一種靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),在各類定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。絕對定量策略可用于蛋白質(zhì)及其修飾狀態(tài)的絕對定量。將穩(wěn)定同位素標(biāo)記的合成肽作為內(nèi)標(biāo),可以模擬蛋白水解形成的天然肽,也可以利用共價(jià)修飾(如,磷酸化,甲基化,乙;龋﹣碇苽。通過在串聯(lián)質(zhì)譜中使用選擇反應(yīng)監(jiān)測分析(selected reaction monitoring, SRM),將AQUA內(nèi)標(biāo)肽用于蛋白水解后精確定量地測定蛋白質(zhì)和翻譯后修飾蛋白質(zhì)的絕對水平。
生物質(zhì)譜技術(shù)的進(jìn)步促進(jìn)了大規(guī)模量化細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)水平分析方法的進(jìn)步。
絕對定量分析(AQUA)
蛋白質(zhì)絕對定量策略是蛋白質(zhì)定量和翻譯后修飾的有效檢測手段。通過使用含有穩(wěn)定同位素標(biāo)簽的合成多肽實(shí)現(xiàn)絕對定量:通過發(fā)現(xiàn)質(zhì)譜信號與蛋白質(zhì)濃度之間的關(guān)系為基礎(chǔ),每摩爾蛋白質(zhì)中三個(gè)最強(qiáng)的胰蛋白酶肽的平均質(zhì)譜信號響應(yīng)是恒定的,變異系數(shù)小于10%。只要給定一個(gè)內(nèi)標(biāo)(含有問答同位素標(biāo)簽的合成多肽),通過質(zhì)譜信號與蛋白質(zhì)濃度之間的關(guān)系可用于測定通用信號響應(yīng)因子(counts/mol)。所有測定的蛋白質(zhì)的通用信號響應(yīng)因子都是相同的。
絕對定量方法依賴于使用合成內(nèi)標(biāo)肽,該肽在消化過程中以已知濃度引入到細(xì)胞裂解液中。在串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測過程中,通過SRM法對水解的蛋白樣品進(jìn)行分析,可以直接檢測和定量天然肽和同位素標(biāo)記的AQUA內(nèi)標(biāo)肽。該方法的簡便、靈敏,加上串聯(lián)質(zhì)譜儀的廣泛應(yīng)用,使AQUA絕對定量分析策略成為一種直接從細(xì)胞裂解物中測定蛋白質(zhì)水平和翻譯后修飾的有效的方法。
百泰派克生物科技提供后續(xù)生物信息學(xué)分析服務(wù):
GO功能注釋及富集分析
COG功能注釋及富集分析
差異表達(dá)蛋白聚類分析
蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析
差異蛋白質(zhì)統(tǒng)計(jì)分析
定量蛋白組分析
半定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析
翻譯后修飾蛋白組分析
靶向蛋白質(zhì)組學(xué)
4D蛋白質(zhì)組學(xué)
MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析
基于Label Free的定量蛋白組分析
基于標(biāo)簽的蛋白質(zhì)定量技術(shù)-iTRAQ,TMT,SILAC
TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白組學(xué)分析
DIA定量蛋白質(zhì)組學(xué)
SWATH定量蛋白組學(xué)服務(wù)
2D-DIGE定量蛋白質(zhì)組學(xué)
蛋白質(zhì)組學(xué)生物信息學(xué)分析