漢恒生物(Hanbio)提供Agilent和Affymetrix平臺的mirarray篩選服務及后續(xù)的芯片數(shù)據(jù)分析及靶基因聚類分析。
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microRNA技術概述
miRNA(microRNA)是一類長度約為20-24nt 的內(nèi)源性非編碼RNA,廣泛參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控活動,其中多數(shù)miRNA具有高度序列保守性、表達時序性和組織特異性。
最近的研究表明,miRNA參與了各種各樣的調(diào)節(jié)途徑,包括細胞增殖與凋亡、生長發(fā)育、器官形成、造血過程、脂肪代謝、病毒防御等各種功能,具有重要的基因表達調(diào)控作用。
現(xiàn)在主流的芯片平臺是Agilent和Affymetrix,Agilent只檢出成熟體,而Affy的芯片前體和成熟體皆檢出,假陽性率較高,但Affy的容量相比Agilent的大很多。 漢恒生物(Hanbio)提供Agilent和Affymetrix平臺的mirarray篩選服務及后續(xù)的芯片數(shù)據(jù)分析及靶基因聚類分析。
檢測原理
1. 針對Agilent miRNA芯片采用獨特的莖環(huán)狀探針設計;
2. miRNA成熟體3’端進行Cy熒光標記,這個新標記的C堿基將與探針序列中的G堿基雜交;
3. 探針形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)起到了穩(wěn)定雜交體,并限制miRNA前體雜交(A);
4. 通過縮短形式的探針設計,降低雜交體穩(wěn)定性,使多個探針的退火溫度趨向 一致(B)。這種設計提高了雜交特異性和靈敏度。
技術優(yōu)勢
1. 特異性高:通過特殊的探針設計有效區(qū)分miRNA成熟體和miRNA前體,并有效區(qū)分序列高度相似的不同miRNA;
2. 靈敏度高:直接用Total RNA進行實驗,無需miRNA分離過程,只需100ng的Total RNA即可用來進行標記實驗;
3. 樣品適用范圍廣:各種新鮮組織、冰凍組織、FFPE組織、脫落細胞等均可進行實驗;
4. 動態(tài)范圍廣:檢測豐度跨4個log,最高可達6個log。低至6000個拷貝的分子就可以檢出;
5. 芯片更新迅速、定制方便:數(shù)據(jù)來源于Sanger 數(shù)據(jù)庫最新版本;對于人、大鼠、小鼠之外的動物物種,可以方便的通過eArray進行定制。