簡(jiǎn)介

miRNAs與靶基因的3’UTR結(jié)合后，一般功能主要表現(xiàn)為抑制mRNA的翻譯，為了檢測(cè)其效果，我們可以用Western Blot的方法檢測(cè)靶蛋白的表達(dá)水平，也可以用qRT-PCR進(jìn)行檢測(cè)靶標(biāo)基因的表達(dá)。但是這兩種方式都不能有效地說明是miRNAs直接起作用的結(jié)果。因此為了檢測(cè)miRNA靶標(biāo)的有效性，構(gòu)建Sensor reporter并進(jìn)行活性檢測(cè)，才是對(duì)miRNAs與靶基因3’UTR的關(guān)系作出準(zhǔn)確判斷的方法。

 服務(wù)優(yōu)勢(shì)

（1）采用Promega公司特有psiCHECK質(zhì)粒；

（2）所采用的Luciferase雙熒光報(bào)告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度；

（3）采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)，操作簡(jiǎn)便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細(xì)胞類型。

服務(wù)流程

（1）PCR擴(kuò)增靶基因的3’UTR，或直接合成結(jié)合位點(diǎn)序列；

（2）將上述確定的靶基因DNA片段克隆至報(bào)告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）克隆miRNA表達(dá)載體；

（4）將報(bào)告載體與miRNA表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

（5）多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶原始數(shù)據(jù)及項(xiàng)目報(bào)告；

 注：為了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性，可加入靶標(biāo)基因3’UTR區(qū)microRNA預(yù)測(cè)結(jié)合區(qū)域的突變體作為對(duì)照，進(jìn)一步說明問題。

附：psiCHECK質(zhì)粒圖譜

漢恒生物實(shí)例：

    漢恒生物通過合成mimics，構(gòu)建可能靶基因的3’UTR報(bào)告基因系統(tǒng)成功驗(yàn)證miRNA與靶基因的關(guān)系。