CRISPR/Cas9 產(chǎn)品及服務(wù)

 CRISPR/Cas9 基因敲除原理介紹

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一種來(lái)自細(xì)菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫機(jī)制。在細(xì)菌及古細(xì)菌中，CRISPR系統(tǒng)共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關(guān)蛋白（Cas蛋白）共同發(fā)揮作用，而Ⅱ類系統(tǒng)只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應(yīng)用提供了便利條件。

目前，來(lái)自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系統(tǒng)應(yīng)用最為廣泛。Cas9 蛋白（含有兩個(gè)核酸酶結(jié)構(gòu)域，可以分別切割DNA 兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結(jié)合成復(fù)合物，然后通過(guò)PAM序列結(jié)合并侵入DNA，形成RNA-DNA復(fù)合結(jié)構(gòu)，進(jìn)而對(duì)目的DNA雙鏈進(jìn)行切割，使DNA雙鏈斷裂。 

由于PAM序列結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單（5’-NGG-3’），幾乎可以在所有的基因中找 到大量靶點(diǎn)，因此得到廣泛的應(yīng)用。CRISPR-Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成功應(yīng)用于植物、細(xì)菌、酵母、魚(yú)類及哺乳動(dòng)物細(xì)胞，是目前最高效的基因組編輯系統(tǒng)。 

通過(guò)基因工程手段對(duì)crRNA和tracrRNA進(jìn)行改造，將其連接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有與野生型RNA類似的活力，但因?yàn)榻Y(jié)構(gòu)得到了簡(jiǎn)化更方便研究者使用。通過(guò)將表達(dá)sgRNA的原件與表達(dá)Cas9的原件相連接，得到可以同時(shí)表達(dá)兩者的質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染細(xì)胞，便能夠?qū)δ康幕�因進(jìn)行操作。

      圖示：Cas9通過(guò)向?qū)�RNA結(jié)合到目標(biāo)DNA上并進(jìn)行切割