簡(jiǎn)介

    細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖、遺傳的基礎(chǔ)，是細(xì)胞最基本的生理活動(dòng)。方法有流式PI檢測(cè)、Ki67法等。漢恒生物為您提供全方位的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)服務(wù)。

Cellcycle 流式細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

    通常利用通常用PI染細(xì)胞核，PI在一定波長(zhǎng)的光下發(fā)出熒光，其強(qiáng)度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發(fā)光基團(tuán)也可作為標(biāo)記物，分選細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)步驟：

（1）將細(xì)胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板，80％匯合后轉(zhuǎn)染。

（2）24小時(shí)后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當(dāng)?shù)目股�素（真核表達(dá)載體上的抗性標(biāo)記）進(jìn)行培養(yǎng)（該步可選）。

（3）48－72小時(shí)后用胰酶消化收集細(xì)胞，PBS洗兩遍，棄上清，加入1ml 70％預(yù)冷乙醇中，吹打均勻，4℃固定12小時(shí)以上。

（4）PBS洗滌去乙醇，1000rpm, 5min，洗兩遍。

（5）0.5 mlPBS重懸細(xì)胞，加入PI和 RNaseA至終濃度50µg/ml，37℃ 溫浴30 min。

（6）用流式細(xì)胞儀測(cè)定周期。

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

RNaseA：10mg/ml

Ki67免疫熒光實(shí)驗(yàn)

    增殖細(xì)胞核抗原Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)。 Ki-67抗原是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物指標(biāo)，可以通過(guò)Ki-67抗原的檢測(cè)，了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性。腫瘤增殖Ki67表達(dá)范圍覆蓋除G0 期以外的各增殖周期細(xì)胞。研究結(jié)果提示PCNA 和Ki67 均可較好地用于檢測(cè)乳腺癌組織中的增殖細(xì)胞，二者基本可以互為代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表達(dá)，更具可用性。兩者具有一定的互補(bǔ)性。Ki-67在低分化腺癌組織中的表達(dá)較在中高分化腺癌組織的表達(dá)明顯升高，表明Ki67 染色陽(yáng)性程度與組織學(xué)分級(jí)的相關(guān)性。表明Ki67表達(dá)與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān),是一個(gè)不良預(yù)后因素，對(duì)乳腺癌的診斷治療及預(yù)后評(píng)價(jià)有重要的參考價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖：