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                                環(huán)狀RNA芯片技術(shù)服務(wù)
                                康成生物是Arraystar公司中國地區(qū)唯一代理商,為您提供一站式circRNA芯片技術(shù)服務(wù),您只需要提供保存完好的組織或細(xì)胞標(biāo)本,康成的技術(shù)服務(wù)人員就可為您完成全部實驗操作,并提供完整的實驗報告。
                                服務(wù)類別:芯片與生物信息學(xué)總訪問:2276
                                最后更新:2018-11-26半年訪問:76
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                                • 服務(wù)介紹
                                • 公司簡介

                                    環(huán)狀RNA(circRNA)是一類由特殊剪接機制形成的、具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)、大量存在于真核轉(zhuǎn)錄組中的非編碼RNA;也是目前生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點分子。circRNA分子的組織特異性、疾病特異性、時序特異性及高穩(wěn)定性等特征,使得circRNA作為臨床疾病的biomarker具有明顯的優(yōu)勢。近來研究顯示,環(huán)狀RNA在不同物種中起到miRNA海綿的作用,稱之為競爭性內(nèi)源RNA(ceRNA),即能競爭性結(jié)合miRNA。而與疾病關(guān)聯(lián)性miRNA的相互作用說明環(huán)狀RNA對疾病的調(diào)控起著非常重要的作用。此外,一些內(nèi)含子類型的環(huán)狀RNA(ciRNA)會促進宿主基因的轉(zhuǎn)錄。
                                    為了能夠更好地研究circRNA,美國Arraystar公司在全球首款circRNA芯片基礎(chǔ)上迅即升級版本為V2.0。其circRNA來源融合了環(huán)狀RNA研究的最新頂尖文獻,所有cicrRNA都經(jīng)過了嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒烌炞C,以便于對不同生理及病理條件下的circRNA進行系統(tǒng)的研究。同時我們對所有差異表達的circRNA用高匹配值的miRNA靶標(biāo)位點進行了標(biāo)注,這將有利于對circRNA作為天然miRNA海綿功能的進行研究。
                                 

                                康成生物是Arraystar公司中國地區(qū)唯一代理商,為您提供一站式circRNA芯片技術(shù)服務(wù),您只需要提供保存完好的組織或細(xì)胞標(biāo)本,康成的技術(shù)服務(wù)人員就可為您完成全部實驗操作,并提供完整的實驗報告。


                                Arraystar環(huán)狀RNA芯片產(chǎn)品列表

                                服務(wù)

                                芯片

                                規(guī)格

                                描述

                                Human Circular RNA  Array Service

                                NEW  Human Circular RNA Array V2.0

                                8 × 15K

                                13,617 human circular RNAs

                                Mouse Circular RNA  Array Service

                                NEW  Mouse Circular RNA Array V2.0

                                8 × 15K

                                14,236 Mouse circular RNAs

                                Rat Circular RNA  Array Service

                                NEW  Rat Circular RNA Array V2.0

                                8 × 15K

                                14,145 Rat circular RNAs

                                 

                                Arraystar環(huán)狀RNA芯片特點

                                · 全面、系統(tǒng)的circRNA收集:circRNA研究領(lǐng)域頂尖期刊和權(quán)威公共數(shù)據(jù)庫,運用強大的信息篩選系統(tǒng),挑選出最可靠的circRNA。
                                 
                                · 高效、精準(zhǔn)的circRNA檢測:剪接位點特異性探針與Rnase R預(yù)處理雙重保障,即便相應(yīng)線性RNA存在也能特異性檢測circRNA。
                                 
                                · 嚴(yán)謹(jǐn)、可靠的Spike-in對照:在RNA樣品中加入一組由ERCC (External RNA Controls Consortium)開發(fā)的外源性RNA,可對RNA擴增,標(biāo)記和芯片雜交過程中產(chǎn)生的實驗偏差進行校正,增加樣本間結(jié)果比較的可靠性。
                                 
                                · 詳盡、豐富的circRNA注釋:Arraystar miRNA靶基因預(yù)測軟件對circRNA上的保守miRNA的結(jié)合位點進行了預(yù)測,并對其中匹配分值較高的位點進行了注釋(下圖)。此外,我們還提供了與circRNA對應(yīng)的線性mRNA信息。根據(jù)信息,客戶可以很方便地從不同角度研究circRNA的作用機制和生物功能。

                                               

                                   
                                *圖釋:circRNA芯片實驗大體流程(上圖)及詳細(xì)的circRNA注釋(下圖):1)與circRNA對應(yīng)的線性mRNA信息;2)circRNA上匹配度比較好的保守miRNA的結(jié)合位點。
                                 
                                circRNA高通量篩選的利器:RNA-seq or microarray?
                                    circRNA在細(xì)胞內(nèi)含量極低,約占線性RNA的5-10%,通過測序獲得的circular junction reads 數(shù)目更低。RNA測序僅僅能有效檢測低于5% 的circRNAs(圖6),即便將測序量提高到300M reads,對于檢測準(zhǔn)確度的影響也是微乎其微。
                                    測序不是circRNA高通量篩選的最優(yōu)檢測手段,circRNA-seq需要雙端模式和極高的測序量。此外,后續(xù)的數(shù)據(jù)分析(如mapping所需數(shù)據(jù)庫、circRNA轉(zhuǎn)錄本組裝、特殊生物信息學(xué)算法、計算機篩選程序等)也存在一系列難題。由于上述因素所限,通過circRNA-seq發(fā)現(xiàn)新的circRNA的可能性幾乎為零。
                                    circRNA芯片采用特異性剪接位點探針與外切酶預(yù)處理雙重保障,能夠準(zhǔn)確檢測樣本中circRNA的表達。芯片雜交不受RNA豐度的影響,即便在一個細(xì)胞中只含一個circRNA拷貝也能夠做到特異性檢測。此外,芯片避免了circRNA-seq復(fù)雜的建庫過程,其簡單成熟的技術(shù)是circRNA高通量篩選的首選平臺。

                                               
                                *圖釋:定量可靠的轉(zhuǎn)錄本比例與測序深度關(guān)系圖。RNA測序一般產(chǎn)生低于30M mRNA reads(藍圈),低于0.5M circular junction reads(紅圈),真正得到有效檢測的circular junctions低于5%。(Adopted from Labaj et al, (2011) Bioinformatics [PMID 21685096].)

                                康成生物環(huán)狀RNA芯片技術(shù)服務(wù)主要實驗流程
                                    1. 樣品RNA抽提

                                   • 實驗對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml的RNA抽提試劑TRIzol(Invitrogen),勻漿后抽提RNA。
                                   • 實驗對象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,完全吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑TRIzol,裂解后抽提RNA。
                                    2.  RNA質(zhì)量檢測
                                  • 使用Nanodrop測定RNA 在分光光度計260nm、280nm和230nm的吸收值,以計算濃度并評估純度。
                                  • 用甲醛電泳試劑進行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測RNA純度及完整性。
                                  • 提供RNA QC報告。
                                    3. RNase R處理
                                    4. cDNA/aRNA樣品合成和標(biāo)記
                                    5. 標(biāo)記效率質(zhì)量檢測

                                  • 使用Nanodrop檢測熒光標(biāo)記效率,標(biāo)記效率合格以保證后續(xù)芯片實驗結(jié)果的可靠性。
                                    6. 芯片雜交
                                  • 在標(biāo)準(zhǔn)條件下將標(biāo)記好的探針和高密度基因組芯片進行雜交。
                                    7. 圖像采集和數(shù)據(jù)分析
                                  • 使用GenePix 4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強度,并將實驗結(jié)果轉(zhuǎn)換成數(shù)字型數(shù)據(jù)保存,使用配套軟件對原始數(shù)據(jù)進行分析運算。
                                    8. 提供實驗報告:
                                  • Scanning Image: Cy3熒光掃描圖像;
                                  • Scatter Plot: 散點圖,X軸為Control信號值,Y軸為Experiment信號值,表示信號數(shù)據(jù)總體分布趨勢;
                                  • Raw Data: 探針的掃描熒光信號強度原始數(shù)據(jù);
                                  • Normalized Data: 經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)方法標(biāo)準(zhǔn)化后數(shù)值;
                                  • P–value: T-test統(tǒng)計分析顯著差異表達的基因,p-value越小,該circRNA在兩組樣本間差異表達越顯著;
                                  • Significant Up & Down Regulated CircRNA List: 顯著差異表達的circRNA列表包含F(xiàn)old Change, p-value以及circRNA的詳細(xì)注釋信息(相應(yīng)的線性mRNA和miRNA結(jié)合位點)。


                                康成客戶實例——Arraystar環(huán)狀RNA芯片
                                circRNA在免疫衰老中的相關(guān)研究 (Comprehensive circular RNA profiling reveals that circular RNA100783 is involved in chronic CD28-associated CD8(+)T cell ageing. Immunity & Ageing, 2015)
                                    生物機體免疫系統(tǒng)隨著年齡的增長而不斷惡化,這個過程被稱為免疫衰老(immunosenescence);免疫衰老與系統(tǒng)炎癥反應(yīng)、慢性炎癥疾病及癌癥發(fā)生等密切相關(guān),但目前對引發(fā)免疫衰老的機制了解的甚少。該研究通過Arraystar circRNA芯片篩選發(fā)現(xiàn):在健康成人與免疫力低下的老年人的外周血淋巴細(xì)胞中,circRNA的表達譜具有明顯的差異。在差異表達的circRNA中,研究者通過qPCR驗證發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_100783可以明顯區(qū)分兩種不同類型的樣本,可以作為免疫衰老的biomarker。研究者接著對circRNA可能結(jié)合的miRNA進行了靶基因預(yù)測,推測circRNA很可能通過調(diào)控磷酸蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來影響免疫細(xì)胞衰老的過程。
                                 

                                 

                                上?党缮锕こ逃邢薰 

                                地址:上海市漕河涇高新技術(shù)開發(fā)區(qū)虹漕路421號63號樓2樓 
                                免費熱線:400-886-5058 ; 800-820-5058(座機)
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