MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)

    實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（Real-time Quantitative PCR）是在PCR反應(yīng)體系當(dāng)中加入熒光試劑，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR的進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ唬�靈敏，快速，高重復(fù)地精確定量起始模板的濃度。
    康成生物將實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)與MeDIP技術(shù)完美結(jié)合。首先通過MeDIP技術(shù)富集甲基化的DNA片段，然后利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，最后經(jīng)過數(shù)據(jù)分析處理得到檢測(cè)的生物樣品中特定位點(diǎn)的甲基化水平的精確數(shù)值。

MeDIP-qPCR技術(shù)特點(diǎn)
• 高特異性，針對(duì)感興趣的基因啟動(dòng)子或CpG島設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)定量PCR引物
• 超寬的線性范圍，可跨越7個(gè)數(shù)量級(jí)
• 精確度高，重復(fù)性好
• 靈敏度高

康成生物MeDIP-qPCR技術(shù)服務(wù)流程
A. 將基因組DNA 超聲打斷成400bp-500bp片段
B. 加熱變性，并將變性后的單鏈DNA樣品分為兩份
C. 其中一份單鏈DNA樣品加入抗5’-甲基胞嘧啶抗體，另一份作為Total input DNA樣品
D. 使用親和層析分離C步樣品中的甲基化DNA片段的抗體復(fù)合物，樣品中其余的非甲基化DNA片段被洗脫。純化得到甲基化DNA片段（MeDNA-IP DNA）
E. 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
•  Total input DNA樣品作為模板，用待測(cè)基因特異性引物進(jìn)行qPCR檢測(cè)得到Ct (input)
•  MeDNA-IP DNA樣品作為模板進(jìn)行檢測(cè)得到Ct (IP)
•  待測(cè)基因甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）的效率（MeDIP / Total input）可通過以下公式計(jì)算：
   %（MeDIP / Total input）= 2^[ Ct (input)- Ct (IP) ] X 100

康成客戶實(shí)例----MeDIP-qPCR
Quantitative detection of multiple gene promoter hypermethylation in tumor tissue, serum, and cerebrospinal fluid predicts prognosis of malignant gliomas. Neuro Oncol., 2010.
    研究人員利用MeDIP-qPCR技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在不同惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤病人的腫瘤組織，血清和腦脊髓液樣本中，MGMT, p16INK4a, TIMP-3,和 THBS1四個(gè)基因啟動(dòng)子區(qū)域都發(fā)生了高甲基化，而且血清和腦脊髓液的DNA甲基化水平與腫瘤組織基本一致（見下圖）。通過與臨床生存數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，MGMT, p16INK4a和THBS1的甲基化水平可以作為獨(dú)立的預(yù)測(cè)因子用于腫瘤的預(yù)后分析。因此血清或腦脊液中這些基因的甲基化有望成為新的腫瘤標(biāo)志物，同時(shí)檢測(cè)這些基因的甲基化水平也為惡性膠質(zhì)瘤病人的化療方案選擇和預(yù)后分析提供了新的理論依據(jù)。

上圖：MeDIP/Input值表示DNA甲基化水平的高低；圓圈代表不同的病人樣本；黑色短線是有效區(qū)分病人預(yù)后好和差的甲基化閾值。

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【表觀基因組學(xué)】 DNA甲基化芯片、DNA羥甲基化芯片、染色質(zhì)免疫共沉淀芯片、DNA甲基化測(cè)序、DNA羥甲基化測(cè)序、染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序、MeDIP-PCR、hMeDIP-PCR、ChIP-PCR等

【轉(zhuǎn)錄組學(xué)】LncRNA芯片、LncPath™芯片、環(huán)狀RNA芯片、T-UCR芯片、microRNA芯片、piRNA芯片、全基因組表達(dá)譜芯片、RNA測(cè)序、RNA m6A甲基化測(cè)序、small RNAs測(cè)序系列（microRNA測(cè)序、tRF&tiRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、piRNA測(cè)序等）、LC-MS tRNA修飾檢測(cè)、 nrStar™ ncRNA PCR芯片（tRF&tiRNA，tRNA，snoRNA，F(xiàn)unctional LncRNA）、miRStar™癌癥特異性microRNA PCR芯片、NuRNATM mRNA PCR芯片、功能分類PCR芯片、LncRNA實(shí)時(shí)定量PCR、環(huán)狀RNA實(shí)時(shí)定量PCR、tRF&tiRNA實(shí)時(shí)定量PCR、microRNA實(shí)時(shí)定量PCR、mRNA實(shí)時(shí)定量PCR

【蛋白組學(xué)平臺(tái)】TMT標(biāo)記定量蛋白組學(xué)服務(wù)、Lable-free定量蛋白組學(xué)服務(wù)、磷酸化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、泛素化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、N-糖基化修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、乙�；�修飾蛋白組學(xué)服務(wù)、蛋白-蛋白相互作用組學(xué)

【代謝組學(xué)】靶向代謝組學(xué)、非靶向代謝組學(xué)

【外泌體組學(xué)】外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)、外泌體蛋白質(zhì)組學(xué)、外泌體代謝組學(xué)
康成生物為Agilent、Arraystar、Exiqon、Illumina、Qiagen、Thermo Fisher等國(guó)際知名品牌提供技術(shù)服務(wù)�？党煽蛻舨捎酶黝惣夹g(shù)服務(wù)發(fā)表的SCI論文已超560篇�？党缮�物將持續(xù)聚焦生命科學(xué)發(fā)展的挑戰(zhàn)，提供有競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品和服務(wù)，持續(xù)為客戶創(chuàng)造最大價(jià)值。

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