康成生物為您提供全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)服務(wù),您只需要提供保存完好的組織或細(xì)胞標(biāo)本,就可為您完成全部實驗操作,并提供完整實驗報告?党蛇提供基因網(wǎng)絡(luò)關(guān)系分析、分子標(biāo)志物篩選分析等數(shù)據(jù)挖掘服務(wù)。
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全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)服務(wù)
全基因組基因表達(dá)譜的檢測對疾病研究有非常重要的意義。一方面,基因表達(dá)譜的檢測可以應(yīng)用于疾病生物標(biāo)記物的篩選。另一方面,基因表達(dá)譜的檢測可以為基因功能研究提供線索,有助于揭示疾病發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制。
康成生物為您提供全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)服務(wù),您只需要提供保存完好的組織或細(xì)胞標(biāo)本,康成的芯片技術(shù)服務(wù)人員就可為您完成全部實驗操作,并提供完整的實驗報告。同時,根據(jù)您的研究需要,康成還提供基因網(wǎng)絡(luò)關(guān)系分析、分子標(biāo)志物篩選分析等數(shù)據(jù)挖掘服務(wù)。 |
Agilent表達(dá)譜芯片產(chǎn)品列表
芯片名稱 |
種屬 |
格式 |
基因數(shù) |
Database source |
Whole human genome |
人 |
4 x 44K |
~41,000 |
Goldenpath, Ensembl, Unigene, Human Genome (Build 33), Refseq, GebBank |
whole mouse genome |
小鼠 |
4 x 44K |
~41,000 |
USC mRNA known genes, Natl. Institute on Aging, Genbank, Unigene, Refseq, Ensembl, RIKEN |
whole rat genome |
大鼠 |
4 x 44K |
~41,000 |
Ensembl, UCSC Goldenpath, Unigene, Refseq, Genbank |
SurePrint G3 Human Gene Expression 8x60K v2 Microarray |
人 |
8 x 60 K |
~50,000 |
RefSeq, Ensemble, Unigene, GenBank, Broad Institute Human lincRNA and TUCP catalog |
SurePrint G3 Mouse GE 8x60K Microarray |
小鼠 |
8 x 60 K |
~40,000 |
RefSeq, Ensembl, Unigene, GenBank, RIKEN |
SurePrint G3 Rat GE 8x60K Microarray |
大鼠 |
8 x 60 K |
~30,000 |
RefSeq, Ensembl,Unigene, GenBank |
Agilent還提供多類物種的表達(dá)譜芯片:
動物:兔、豬、斑馬魚、果蠅等 植物:水稻、玉米、擬南芥、煙草等
微生物:大腸桿菌、酵母等
Agilent表達(dá)譜芯片特點(diǎn)
● 原位噴墨合成技術(shù):原位合成的探針使得芯片平臺具有極高的穩(wěn)定性,噴墨合成技術(shù)可以大規(guī)模、靈活地合成探針,為客戶提供最新的芯片設(shè)計。
● 60mer的長探針:與短探針相比,具有更高的信噪比、靈敏度和特異性。
● 權(quán)威公認(rèn):2006年美國FDA發(fā)表的主流芯片平臺評估報告MAQC中,Agilent array 的C-V值、檢測基因數(shù)目、與Taqman探針的重復(fù)性均處于國際同行業(yè)領(lǐng)先水平。
康成生物全基因組表達(dá)譜芯片主要實驗流程
1. 樣品RNA抽提:
a. 實驗對象為組織樣品,取適量(50-100mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,使用BioPulverizerTM冰凍粉碎組織,加1ml的RNA抽提試劑TRIzol(Invitrogen),使用Mini- Bead-Beater-16勻漿后抽提RNA
b. 實驗對象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,加1ml的RNA抽提試劑TRIzol(樣品為貼壁細(xì)胞,每10cm2培養(yǎng)皿TRIzol使用量為1ml),裂解后抽提RNA
2. RNA質(zhì)量檢測:
a. 使用Nanodrop測定RNA 在分光光度計260nm、280nm和230nm的吸收值,以計算濃度并評估純度
b. 用甲醛電泳試劑進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳,檢測RNA純度及完整性
c. 提供RNA QC報告
注意:用于芯片檢測的RNA樣品,必須是高質(zhì)量的,完整的,沒有RNase污染(降解的樣品不能用于標(biāo)記和芯片檢測),沒有基因組污染。
3. cDNA/aRNA樣品合成和標(biāo)記
4. 標(biāo)記效率質(zhì)量檢測:
使用Nanodrop檢測熒光標(biāo)記效率,標(biāo)記效率合格以保證后續(xù)芯片實驗結(jié)果的可靠性
5. 芯片雜交:
在標(biāo)準(zhǔn)條件下將標(biāo)記好的探針和高密度基因組芯片進(jìn)行雜交
6. 圖像采集和數(shù)據(jù)分析:
使用GenePix 4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強(qiáng)度,并將實驗結(jié)果轉(zhuǎn)換成數(shù)字型數(shù)據(jù)保存,使用配套軟件對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析運(yùn)算
7. 提供實驗報告 包括詳細(xì)的實驗方法以及芯片實驗數(shù)據(jù)和圖表,以雙色標(biāo)記實驗為例:
Scanning Image: Cy3、Cy5熒光掃描圖像
Scatter Plot: 散點(diǎn)圖,X軸為Control(Cy3)數(shù)據(jù)值,Y軸為Exp(Cy5)數(shù)據(jù)值,表示芯片上兩通道數(shù)據(jù)總體分布集中趨勢;
MA-plot: MA圖,X軸為A值[log2(Exp)+log2(Control)]/2,代表點(diǎn)的整體信號強(qiáng)度,Y軸為M 值log2(Exp)-log2(Control)表示點(diǎn)的兩通道信號差,可由MA圖觀察芯片數(shù)據(jù)是否存在強(qiáng)度依賴的系統(tǒng)偏移以及信號差異點(diǎn)的比例
Raw Data: 探針的掃描熒光信號強(qiáng)度原始數(shù)據(jù)
Normalized Ratio: 原始數(shù)據(jù)經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)方法標(biāo)準(zhǔn)化后的比值的對數(shù),log2(Exp/ Control)
p –value: T-test統(tǒng)計分析顯著差異表達(dá)的基因,p-value越小,該基因在兩樣本間差異表達(dá)越顯著
Significant Up & Down Regulated Gene List: 給出Fold Change>=2,p-value<0.05的基因列表
上?党缮锕こ逃邢薰
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