1) 制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性2) 病毒顆粒的總數(shù)和病毒滴度:如無(wú)特殊要求我們提供1mL 滴度為1×1010 - 1×1012 個(gè)病毒基因組 / mL 的病毒儲(chǔ)液。
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1 特點(diǎn):
1) 幾乎可以感染所有類型的細(xì)胞。
2) 可以獲得復(fù)制缺陷型 (E1 和E3 缺失) 的腺病毒。
3) 病毒滴度高,產(chǎn)生病毒經(jīng)過(guò)濃縮后可以達(dá)到1012 PFU/mL,能有效的進(jìn)行增殖。
4) 腺病毒載體感染宿主的范圍比較廣,制備容易,操作簡(jiǎn)單.
5) 感染細(xì)胞時(shí),不整合到染色體中,不存在激活致癌基因或插入突變等危險(xiǎn),生物安全性高。
2 原理:
腺病毒 (Adenovirus,Ad) 是一種無(wú)包膜的線狀雙鏈DNA 病毒,其復(fù)制不依賴于宿主細(xì)胞的分
裂。有近50 個(gè)血清型,大多數(shù)Ad 載體都是基于血清型2 和5,通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方式取代E1 和E3 基
因,降低病毒的復(fù)制能力。這些重組病毒僅在高水平表達(dá)E1 和E3 基因的細(xì)胞中復(fù)制,因此是一種
適用于治療的高效控制系統(tǒng)。
3 腺病毒包裝簡(jiǎn)要流程 (以Invitrogen 包裝系統(tǒng)為例)
1) 構(gòu)建表達(dá)siRNA/miRNA 的腺病毒載體。
2) 采用PacI 消化純化的質(zhì)粒。
3) 消化好的腺病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染293A 細(xì)胞,收獲細(xì)胞以制備病毒粗提液。
4) 將病毒粗提液感染293A 細(xì)胞以擴(kuò)增病毒。
5) 分裝,- 80 oC 保存。
6) 滴度測(cè)定目的基因檢定,并出具檢測(cè)報(bào)告。
4 本公司提供的最終產(chǎn)品包括:
1) 重組后的腺病毒載體質(zhì)粒以及測(cè)序圖譜。
2) 產(chǎn)品無(wú)菌檢測(cè)結(jié)果。
3) 腺病毒儲(chǔ)液及相應(yīng)的病毒滴度。
我們保證:1) 制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性2) 病毒顆粒的總數(shù)和病毒滴度:如無(wú)特殊要求我們
提供1mL 滴度為1×1010 - 1×1012 個(gè)病毒基因組 / mL 的病毒儲(chǔ)液。