siRNA載體構建服務程序



1. siRNA表達載體的選用：
本公司選用的siRNA 表達載體含新霉素抗性基因和 GFP 綠色螢光標記，可以建立穩(wěn)定表達系，同時可以實時監(jiān)測載體在細胞中的轉(zhuǎn)染效率。載體中還含有 Amp 抗性基因，可以無限擴增。

2. 設計 siRNA 靶序列
A 、根據(jù)目的mRNA序列，設計3條RNA干擾靶序列，靶序列一般為19 － 21nt 長。

B 、對于每條選定的 siRNA 靶序列，設計 siRNA 正義鏈和反義鏈，以 loop(9nt) 相連，稱為 shRNA（short hairpin RNA ）。
C、陰性對照的設立.

3. 合成模板：
合成每條編碼 shRNA的DNA 模板的兩條單鏈，退火 DNA 單鏈得到 shRNA 的 DNA 雙鏈模板。模板鏈后面接有 RNA PolyIII 聚合酶轉(zhuǎn)錄中止位點，同時兩端分別設計 BamHI 和 HindIII 酶切位點，可以克隆到 siRNA 載體多克隆位點的 BamHI 和 HindIII 酶切位點之間。
4. siRNA 空載體用 BamHI 和 HindIII 雙酶切后， 1 ％瓊脂糖凝膠電泳，回收線性載體。
5. 連接與轉(zhuǎn)化：
把退火的 DNA 模板雙鏈連接到線性載體中。采用 T4 連接酶，插入片斷與載體的摩爾比約為 3 ： 1 。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化 DH5α 大腸桿菌，在 LB Amp 培養(yǎng)基上涂板， 37 ℃ 培養(yǎng)過夜。
6. PCR 鑒定
7. 測序鑒定
8.柱抽提陽性克隆載體并定量。
閃晶生物同時提供腺病毒和慢病毒載體的構建服務,5000.00元/個

上海閃晶分子生物科技有限公司
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Gensynthese  Gene Synthesis DNA Synthese    Peptide Synthesis

MGB probe      Protein expression    Polyclonal Antibody

Related Link     Peptide Synthesis        Chromas       Make Antibody
Lab Consumables          Gene Synthesis        dNTP

全基因合成 基因合成 密碼子優(yōu)化

細胞培養(yǎng) 細胞轉(zhuǎn)染 細胞穩(wěn)轉(zhuǎn) 細胞瞬轉(zhuǎn)

上海閃晶分子生物科技有限公司，座落在上海閔行區(qū)，紫竹科技園；毗鄰上海交大、華東師范大學，及國際知名跨國公司，學術氛圍濃郁，具有得天獨厚的人文環(huán)境。公司擁有1400平方實驗大樓，配備有齊全的研發(fā)、實驗設備，以滿足日益增長的國內(nèi)外客戶需求，是專業(yè)從事生物技術服務的公司；公司擁有一批知名度較高的學科帶頭人和一支訓練有素、多學科配合、以中青年科技人員為主的研究隊伍。公司自研究所改制以來在分子生物學試劑盒、熒光定量PCR、siRNA載體構建、全基因合成、熒光探針修飾、多肽合成、dNTP、Pfu酶、熱啟動Taq酶、DNA marker、基因工程、原生質(zhì)體的培養(yǎng)、細胞融合、單克隆抗體診斷試劑、細胞培養(yǎng)、細胞轉(zhuǎn)染、病毒構建包裝、Western Blot 、蛋白表達純化等研究方向作了深入的研究；

公司擁有從事基因工程、細胞工程、單克隆抗體研究的現(xiàn)代化實驗室和先進的精密設備，如：實時PCR 擴增儀、多肽合成儀、 DNA 合成儀、 DNA 序列分析儀、 FPLC 、高壓液相色譜儀、凍干機、 CO2 培養(yǎng)箱、大型搖床等。

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