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MCE推出超900種一抗和多種二抗產(chǎn)品，涵蓋熱門靶點

瀏覽次數(shù)：2978　發(fā)布日期：2023-11-29　

重磅來襲！抗體

官宣! 近期，MCE 迎來了一位新成員——抗體。抗體 (Antibodies) 是由抗原進入機體，刺激 B 細胞增殖分化為漿細胞后合成并分泌的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合并產(chǎn)生免疫效應(yīng)的球蛋白，又稱免疫球蛋白 (Immunoglobulin，Ig)。抗體重鏈 Fc 區(qū)域的特異性序列決定了 Ig 的類型，如 α-IgA、δ-IgD、ε-IgE、γ-IgG、μ-IgM。輕鏈則有兩種類型，分別為 λ 型和 κ 型 (圖 1)。

圖 1. 抗體結(jié)構(gòu) (左) 和檢測原理 (右) 示意圖

原理：抗體是一種特異性很高的蛋白質(zhì)，可以識別和結(jié)合到特定的抗原上，從而形成抗原-抗體復(fù)合物。抗體檢測利用這種特異性反應(yīng)來檢測體內(nèi)是否存在特定的抗體。

一抗二抗？傻傻分不清楚

小 M 為大家鋪墊了抗體的基礎(chǔ)知識及原理，接下來作為萌新的你可能就要問了，“抗體好像有兩個？”

其實我們常說的抗體指的是第一抗體，即能和抗原特異性結(jié)合的蛋白，種類包括單克隆抗體 (monoclonal antibody，mAb) 和多克隆抗體 (polyclonal antibody, pAb)。前者可識別抗原上的單個表位，而后者能夠特異性結(jié)合同一目標抗原上的不同結(jié)合位點 (圖 2)。

圖 2. mAb 和 pAb 示意圖

雖同是抗體，單克隆抗體與多克隆抗體仍存在著諸多區(qū)別 (表 2)，小 M 為大家簡要整理出來啦~

表 1. mAb 和 pAb 的主要區(qū)別

二抗是能和抗體結(jié)合，即抗體的抗體，其主要作用是檢測抗體的存在，放大一抗的信號。一抗可以特異地結(jié)合目標蛋白，但通常需要發(fā)光物質(zhì)或者顯色基團標記才能被檢測出來，因此會使用可被檢測出的帶有標記（如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團）的二抗與一抗結(jié)合。這樣，當(dāng)一抗結(jié)合到底物上，就可以通過二抗檢測出來。

抗體，如何選擇？

看到這里，可能又有小伙伴迷惑了：抗體選擇辣么多，而且各自都有看家本領(lǐng)，究竟誰才能讓我的 paper 擠進上層社交圈，受到 Science，Cell，Nature 等業(yè)內(nèi)大佬的賞識呢？別急別急，小 M 這有份秘籍，大家照著做，一定不會出錯的。趕緊收藏~

抗體選擇之一抗

分析應(yīng)用類型

根據(jù)所做實驗類型選擇抗體。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息 “應(yīng)用”一欄列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的實驗類型。

如，應(yīng)用：WB, ICC, IF, IHC-P, FC。

分析樣本種屬

根據(jù)樣本種屬選擇抗體。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息 “反應(yīng)性”一欄列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的種屬信息。

如，反應(yīng)性：Human, Mouse, Rat。

選擇抗體宿主物種

一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇較為重要。

① 為避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白間發(fā)生交叉反應(yīng)，所選一抗的來源生物體應(yīng)與樣本中生物體不同。如，若研究小鼠蛋白，則應(yīng)選擇除小鼠外的生物體產(chǎn)生的一抗。假設(shè)選兔源的一抗，二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子 (酶、熒光素、生物素等) 的抗兔 IgG。

② 如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息“宿主”一欄列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的種屬信息。

如，宿主：Rabbit。

分析目的蛋白的結(jié)構(gòu)區(qū)域

① 待測樣本蛋白區(qū)域：確認免疫原 (全長蛋白、蛋白質(zhì)片段、多肽、整個生物體或細胞) 與待檢測蛋白區(qū)域一致或包含在其內(nèi)。

② 樣本的提取或處理過程：有些抗體要求樣品用特定方式處理，許多抗體僅能識別已還原和變性的蛋白質(zhì)(其可暴露出蛋白質(zhì)折疊形成的二級或三級結(jié)構(gòu)中被隱藏的表位)；另一方面，有些抗體僅能識別天然、折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)上的表位。

抗體選擇之二抗

一抗的種屬來源

根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。

① 若一抗是鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗 (山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

② 在特殊實驗中，如雙標實驗，若一抗分別為兔源和鼠來源的，則相應(yīng)的二抗應(yīng)同時為抗兔和抗鼠，可選用驢來源的二抗。

二抗的偶聯(lián)標記

二抗的偶聯(lián)標記類型主要有：

① 酶類標記（如 AP、HRP…）
② 熒光標記（如 FITC、PE、Cy7…）

③ 其他標記（如 Biotin…）

選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。

如：Western blot 和 ELISA，常用的二抗是酶標二抗；細胞或組織標記實驗 (組織免疫化學(xué)，細胞免疫化學(xué)，流式細胞術(shù)) 中通常使用熒光基團標記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。

抗體選擇之內(nèi)參

選擇完抗體，還要好好思考，該怎么選擇內(nèi)參。切忌不管什么樣本，都千篇一律的選擇“GAPDH”或者“β-Actin”。此外，選擇內(nèi)參時，還需要根據(jù)內(nèi)參蛋白在樣本中相應(yīng)的表達量進行選擇。給大家整理了一份內(nèi)參選擇的攻略，請及時收好哦~

表 2. 不同樣本中內(nèi)參選擇參照標準

除表格外，小 M 還有一些小 Tips 要提醒大家喔~

1. β-Actin 不適用于心臟和骨骼肌的樣品，心肌和骨骼肌樣本可以用 α-Actin 做內(nèi)參；
2. 當(dāng)代謝信號通路受到影響，比如組織缺氧，糖尿病研究時 GAPDH 不適合做內(nèi)參等；
3. 涉及細胞增殖時 PCNA 不適合做內(nèi)參；
4. 涉及細胞凋亡時 TBP、Lamin 等不適合做內(nèi)參;
5. Lamin B 不適合作為胚胎干細胞內(nèi)參。

抗體 “有話說”

實驗總有意外，那么會是什么原因?qū)е履?/span>？

1.你真的了解自己的蛋白嗎？

你的蛋白是否容易發(fā)生修飾？是否容易產(chǎn)生聚合體？是否存在同工異構(gòu)體？以及種屬來源都會影響蛋白的分子量。這里，小 M 給大家推薦 “UniProt” 網(wǎng)站，只有了解蛋白的“前世今生”，這世的我們才能 “雙向奔赴”，并“和平相處”呀。

2.你的樣本真的完全裂解了嗎？

這里，小 M 建議選擇合適的裂解液，如 RIPA Lysis Buffer (Strong) 并通過勻漿或超聲破碎的方式，充分使樣本裂解。

3.你真的選擇對的抗體嗎？

科研汪們，切記選擇已驗證過并高特異性的抗體哦。這里，小 M 難免想要凡爾賽一番，小 M 提供的抗體都是具備嚴格，可控的質(zhì)量標準哦。

4.你的實驗操作真的無錯可挑嗎？

這里，小 M 就實驗操作給大家淺淺的提幾條建議：注意配膠時充分混勻，關(guān)注電泳的條件。

1）選擇合適的封閉液（HY-K1027），抗體稀釋液，洗膜液（HY-K1022，HY-K1025）等。

2）配膠過程中，注意膠的狀態(tài)。實驗過程中，根據(jù)自己的目標蛋白，選擇合適的電泳條件。