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MCE推出超900種一抗和多種二抗產(chǎn)品,涵蓋熱門靶點

瀏覽次數(shù):2978 發(fā)布日期:2023-11-29 
重磅來襲!抗體
 
官宣! 近期,MCE 迎來了一位新成員——抗體。抗體 (Antibodies) 是由抗原進入機體,刺激 B 細胞增殖分化為漿細胞后合成并分泌的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合并產(chǎn)生免疫效應(yīng)的球蛋白,又稱免疫球蛋白 (Immunoglobulin,Ig)。抗體重鏈 Fc 區(qū)域的特異性序列決定了 Ig 的類型,如 α-IgA、δ-IgD、ε-IgE、γ-IgG、μ-IgM。輕鏈則有兩種類型,分別為 λ 型和 κ 型 (圖 1)。

圖 1. 抗體結(jié)構(gòu) (左) 和檢測原理 (右) 示意圖

原理:抗體是一種特異性很高的蛋白質(zhì),可以識別和結(jié)合到特定的抗原上,從而形成抗原-抗體復(fù)合物。抗體檢測利用這種特異性反應(yīng)來檢測體內(nèi)是否存在特定的抗體。      
  

一抗二抗?傻傻分不清楚

小 M 為大家鋪墊了抗體的基礎(chǔ)知識及原理,接下來作為萌新的你可能就要問了,“抗體好像有兩個?”

其實我們常說的抗體指的是第一抗體,即能和抗原特異性結(jié)合的蛋白,種類包括單克隆抗體 (monoclonal antibody,mAb) 和多克隆抗體 (polyclonal antibody, pAb)。前者可識別抗原上的單個表位,而后者能夠特異性結(jié)合同一目標抗原上的不同結(jié)合位點 (圖 2)。

圖 2. mAb 和 pAb 示意圖
 

雖同是抗體,單克隆抗體與多克隆抗體仍存在著諸多區(qū)別 (表 2),小 M 為大家簡要整理出來啦~

表 1. mAb 和 pAb 的主要區(qū)別

二抗是能和抗體結(jié)合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。一抗可以特異地結(jié)合目標蛋白,但通常需要發(fā)光物質(zhì)或者顯色基團標記才能被檢測出來,因此會使用可被檢測出的帶有標記(如帶熒光、放射性、化學(xué)發(fā)光或顯色基團)的二抗與一抗結(jié)合。這樣,當(dāng)一抗結(jié)合到底物上,就可以通過二抗檢測出來。
 

抗體,如何選擇?
 
看到這里,可能又有小伙伴迷惑了:抗體選擇辣么多,而且各自都有看家本領(lǐng),究竟誰才能讓我的 paper 擠進上層社交圈,受到 Science,Cell,Nature 等業(yè)內(nèi)大佬的賞識呢?別急別急,小 M 這有份秘籍,大家照著做,一定不會出錯的。趕緊收藏~ 
 

抗體選擇之一抗

01

分析應(yīng)用類型

根據(jù)所做實驗類型選擇抗體。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息 “應(yīng)用”一欄 列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的實驗類型。

如,應(yīng)用:WB, ICC, IF, IHC-P, FC。

02

分析樣本種屬

根據(jù)樣本種屬選擇抗體。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息 “反應(yīng)性”一欄列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的種屬信息。

如,反應(yīng)性:Human, Mouse, Rat。

03

選擇抗體宿主物種

一般說來,在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時,一抗宿主動物的物種選擇較為重要。

① 為避免抗免疫球蛋白的二抗與樣品中的內(nèi)源性免疫球蛋白間發(fā)生交叉反應(yīng),所選一抗的來源生物體應(yīng)與樣本中生物體不同。如,若研究小鼠蛋白,則應(yīng)選擇除小鼠外的生物體產(chǎn)生的一抗。假設(shè)選兔源的一抗,二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子 (酶、熒光素、生物素等) 的抗兔 IgG。

如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況,除免疫組化外的其它對不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法,則抗體宿主物種的影響不大。

MCE 官網(wǎng)在產(chǎn)品頁信息“宿主”一欄列出了該抗體經(jīng)實驗驗證后所適用的種屬信息。

如,宿主:Rabbit。 

04

分析目的蛋白的結(jié)構(gòu)區(qū)域

① 待測樣本蛋白區(qū)域:確認免疫原 (全長蛋白、蛋白質(zhì)片段、多肽、整個生物體或細胞) 與待檢測蛋白區(qū)域一致或包含在其內(nèi)。

樣本的提取或處理過程:有些抗體要求樣品用特定方式處理,許多抗體僅能識別已還原和變性的蛋白質(zhì)(其可暴露出蛋白質(zhì)折疊形成的二級或三級結(jié)構(gòu)中被隱藏的表位);另一方面,有些抗體僅能識別天然、折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)上的表位。
 

抗體選擇之二抗

01

一抗的種屬來源

根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。

若一抗是鼠源的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗 (山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

② 在特殊實驗中,如雙標實驗,若一抗分別為兔源和鼠來源的,則相應(yīng)的二抗應(yīng)同時為抗兔和抗鼠,可選用驢來源的二抗。

02

二抗的偶聯(lián)標記

二抗的偶聯(lián)標記類型主要有:

① 酶類標記(如 AP、HRP…)
② 熒光標記(如 FITC、PE、Cy7…)

③ 其他標記(如 Biotin…)

選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。

如:Western blot 和 ELISA,常用的二抗是酶標二抗;細胞或組織標記實驗 (組織免疫化學(xué),細胞免疫化學(xué),流式細胞術(shù)) 中通常使用熒光基團標記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。
 

抗體選擇之內(nèi)參

選擇完抗體,還要好好思考,該怎么選擇內(nèi)參。切忌不管什么樣本,都千篇一律的選擇“GAPDH”或者“β-Actin”。此外,選擇內(nèi)參時,還需要根據(jù)內(nèi)參蛋白在樣本中相應(yīng)的表達量進行選擇。給大家整理了一份內(nèi)參選擇的攻略,請及時收好哦~
 


表 2. 不同樣本中內(nèi)參選擇參照標準
 

 除表格外,小 M 還有一些小 Tips 要提醒大家喔~
 

1. β-Actin 不適用于心臟和骨骼肌的樣品,心肌和骨骼肌樣本可以用 α-Actin 做內(nèi)參;
2. 當(dāng)代謝信號通路受到影響,比如組織缺氧,糖尿病研究時 GAPDH 不適合做內(nèi)參等;
3. 涉及細胞增殖時 PCNA 不適合做內(nèi)參; 
4. 涉及細胞凋亡時 TBP、Lamin 等不適合做內(nèi)參;
5. Lamin B 不適合作為胚胎干細胞內(nèi)參。
 
抗體 “有話說”
 
實驗總有意外,那么會是什么原因?qū)е履?/span>?

1.你真的了解自己的蛋白嗎?

你的蛋白是否容易發(fā)生修飾?是否容易產(chǎn)生聚合體?是否存在同工異構(gòu)體?以及種屬來源都會影響蛋白的分子量。這里,小 M 給大家推薦 “UniProt” 網(wǎng)站,只有了解蛋白的“前世今生”,這世的我們才能 “雙向奔赴”,并“和平相處”呀。

2.你的樣本真的完全裂解了嗎?

這里,小 M 建議選擇合適的裂解液,如 RIPA Lysis Buffer (Strong) 并通過勻漿或超聲破碎的方式,充分使樣本裂解。

3.你真的選擇對的抗體嗎?

科研汪們,切記選擇已驗證過并高特異性的抗體哦。這里,小 M 難免想要凡爾賽一番,小 M 提供的抗體都是具備嚴格,可控的質(zhì)量標準哦。

4.你的實驗操作真的無錯可挑嗎?

這里,小 M 就實驗操作給大家淺淺的提幾條建議:注意配膠時充分混勻,關(guān)注電泳的條件。

1)選擇合適的封閉液(HY-K1027),抗體稀釋液,洗膜液(HY-K1022,HY-K1025)等。

2)配膠過程中,注意膠的狀態(tài)。實驗過程中,根據(jù)自己的目標蛋白,選擇合適的電泳條件。
 

MCE 抗體(節(jié)選)

目前,MCE 提供 900+ 一抗和多種二抗,涵蓋熱門靶點,助力您的科研成果 “通萬路”!快來看看咱家的明星產(chǎn)品 (因出場位置受限,只邀請了 6 位明星代表)

PI3 Kinase p55 gamma Rabbit pAb 

應(yīng)用:WB, IHC-P, ICC/IF
反應(yīng)物種:Human, Mouse, 
Rat

WB analysis of PI3 Kinase p55 

gamma Rabbit pAb on different 

lysates.

Lane 1-3: 

HEK-293T, 3T3, C6 cell lysates.

Chk1 Rabbit pAb

應(yīng)用:WB, ICC/IF, IP

反應(yīng)物種:Human, Mouse, Rat 

WB analysis of Chk1 Rabbit 

pAb on different lysates.

Lane 1-3: 

THP-1, C6, PC-12 cell lysates.

HDAC4 (4A3) Mouse mAb 

應(yīng)用:WB, IP, IHC-P

反應(yīng)物種:Human, Mouse, Rat

IHC-P analysis of paraffin-

embedded human lung cancer 

tissue using HDAC4 (A5) 

Mouse mAb 

ATP Citrate Lyase (3D9) Mouse mAb  

應(yīng)用:WB, ICC/IF, FC, IHC-P

反應(yīng)物種:Human, Mouse, 

Monkey

IHC-P analysis of paraffin-

embedded mouse testis tissue 

using ATP Citrate Lyase (D7) 

Mouse mAb.

JNK1 (1A4) Mouse mAb

應(yīng)用:WB, ICC/IF

反應(yīng)物種:Human, Mouse, Rat

IF analysis of JNK1 (A3) 

Mouse  mAb in 3T3 cells 

using JNK1 antibody.

Phospho-AMPK alpha 1 (Ser496) Rabbit pAb   

應(yīng)用:WB, IHC-P, ICC/IF

反應(yīng)物種:Human, Mouse, Rat

IF analysis of Phospho-AMPK 

alpha 1 (Ser496) Rabbit pAb 

in Hela cells using AMPK

alpha 1 (Phospho-Ser487) 

antibody.

 
小結(jié)

好啦,我的新朋友就介紹到這里啦!最后的最后,小 M 衷心祝福使用 MCE 抗體產(chǎn)品的科學(xué)汪都有機會得到 Science,Cell,Nature 等業(yè)內(nèi)大佬的賞識,咱們下期再會哦!

相關(guān)產(chǎn)品

Phospho-AKT1 (Ser473) Rabbit MAb

可檢測 AKT1 在絲氨酸 473 位點的磷酸化。AKT1 圍繞 S473 區(qū)域與 AKT2 和AKT3 中的相應(yīng)區(qū)域具有高度相似性,因此如果在相應(yīng)的絲氨酸上磷酸化,可能會與這些蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。

alpha Tubulin Rabbit MAb

可檢測 alpha-tubulin 總蛋白的內(nèi)源水平,并不會與重組 β-tubulin 蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。

Bcl2 Rabbit MAb

可檢測 Bcl-2 總蛋白的內(nèi)源水平。

Caspase 11 Rabbit MAb

可識別 Caspase-11 總蛋白的內(nèi)源水平。

Cleaved-PARP1 Rabbit MAb

可檢測由 caspase 裂解產(chǎn)生的 PARP1 大片段 (89 kDa) 的內(nèi)源水平。該抗體不識別全長 PARP1 或其他 PARP 同工型。

HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)

在最佳條件下,將抗兔 IgG(H+L)片段與辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián),在 WB 實驗中用作二抗。

Alexa Fluor® 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)

在最佳條件下,將抗鼠 IgG(H+L)片段與 Alexa Fluor® 488 偶聯(lián)。


MCE 的所有產(chǎn)品僅用作科學(xué)研究或藥證申報,我們不為任何個人用途提供產(chǎn)品和服務(wù)
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