一、摘要
一百多年前，“魔術(shù)子彈”學(xué)說首次提出了具有靶向特異性的抗體可以用來治療疾病。此后，隨著單克隆抗體制備技術(shù)的成熟，以及癌癥血清療法的發(fā)展，靶向腫瘤抗原的治療性抗體開始進(jìn)入臨床，至今已有20余種抗體藥物用于癌癥的治療。近兩年，以免疫檢查點(diǎn)蛋白拮抗劑、雙特異性抗體、抗體藥物偶聯(lián)藥物等為代表的新一代抗體藥物，在治療惡性腫瘤上不斷取得突破性進(jìn)展。

“免疫逃逸”是腫瘤發(fā)生過程中的重要標(biāo)志和主要機(jī)制。腫瘤的免疫療法 (Immunotherapy) 是通過增強(qiáng)機(jī)體對(duì)癌細(xì)胞的識(shí)別能力，利用機(jī)體自身的免疫能力對(duì)腫瘤進(jìn)行清除【1】。與手術(shù)、化療、放療等傳統(tǒng)療法相比，腫瘤免疫療法具有腫瘤靶向性好、療效持久，臨床副作用小等優(yōu)點(diǎn)。

二、CD16對(duì)NK細(xì)胞的影響
NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）是固有免疫的主力軍，體外NK細(xì)胞的分化過程可以通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。NK細(xì)胞起源于CD34+造血干細(xì)胞（CD34+HSCs），其分化主要經(jīng)歷三個(gè)階段：NK前體細(xì)胞（NKP），未成熟的NK細(xì)胞（iNK）和成熟NK細(xì)胞（mNK）。CD161的首次出現(xiàn)意味著細(xì)胞進(jìn)入NKP階段；隨著活化受體NKp44的表達(dá)，iNK逐漸形成；最后，CD16和殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體（KIR）的表達(dá)標(biāo)志著NK細(xì)胞進(jìn)入成熟階段。這也就說明，CD16對(duì)于NK細(xì)胞的成熟起著決定性的作用。

其實(shí)，最先發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面抗原就是CD16，CD16即FcγRⅢ，為分子量為50000～70000的糖蛋白，屬Ig超家族成員，已知參與抗體依賴性的細(xì)胞毒性(ADCC)作用，其最顯著的特征在于膜受體負(fù)責(zé)觸發(fā)的裂解是由NK細(xì)胞完成的。CD16作為低親和力受體對(duì)于一些IgG的Fc部分，與CD3ζ的Fcε關(guān)聯(lián)受體I(Fc的εRI)γ鏈結(jié)合，共同參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。NK細(xì)胞上交聯(lián)的CD16直接導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca+水平的增加和一系列的類似于T細(xì)胞受體激活的級(jí)聯(lián)生化反應(yīng)。有文獻(xiàn)報(bào)道，CD16對(duì)人NK細(xì)胞作為裂解受體介導(dǎo)直接殺傷某些病毒感染和腫瘤細(xì)胞的過程，是依賴于抗體的緊密結(jié)合來實(shí)現(xiàn)的。

此外，NK細(xì)胞表面還有多種重要抗原，比如CD56（與纖維生長因子-1——FGFR-1結(jié)合），CD2(淋巴細(xì)胞相關(guān)分子2,LFA-2），CD58（LFA-3），CD11a/CD18（LFA-1）等。
 

NK細(xì)胞的分化

此外，設(shè)計(jì)以NK細(xì)胞表面活化受體CD16和NKG2D為靶點(diǎn)的雙特異性分子，可以靶向NK細(xì)胞識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。（雙特異性分子被設(shè)計(jì)用來識(shí)別激活NK細(xì)胞受體結(jié)合另一端的腫瘤抗原，以使NK細(xì)胞殺滅過度表達(dá)這些抗原的腫瘤細(xì)胞）
 

利用NK細(xì)胞潛能的治療方法示意圖

三、如何增強(qiáng)NK細(xì)胞抗癌效力
總的來說,利用NK來抗擊腫瘤的方式主要概括為三點(diǎn)：即激活NK細(xì)胞、解除NK細(xì)胞的免疫抑制、控制NK細(xì)胞毒性。NK細(xì)胞作為繼T細(xì)胞用于癌癥治療的第二大免疫細(xì)胞有著非凡的地位，雖然NK細(xì)胞療法的開發(fā)可以參照現(xiàn)有的T細(xì)胞療法，但同時(shí)也應(yīng)注意到，這兩種免疫細(xì)胞有不同的作用機(jī)制，要想真正將NK細(xì)胞的抗癌效力發(fā)揮出來，還需要對(duì)其分子特征和功能的進(jìn)一步探索和驗(yàn)證。

2021年5月，意大利科學(xué)家Capuano等在Cancer雜志上發(fā)表的一篇綜述上指出，CD16觸發(fā)的ADCC細(xì)胞毒效應(yīng)和分別由NK細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用是mAbs介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞殺傷并達(dá)到治療效果的主要免疫依賴機(jī)制。目前，針對(duì)激活和/或抑制NK細(xì)胞CD16受體，以微調(diào)mAbs抗腫瘤反應(yīng)的策略已經(jīng)在積極研究，并將在未來進(jìn)一步推進(jìn)【2】。

增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)mAbs反應(yīng)的策略主要有：①改善單抗與CD16相互作用。mAbs Fc區(qū)域的基因改造或糖工程已被關(guān)注并陸續(xù)開發(fā)，以調(diào)節(jié)它們與Fcγr家族的激活和抑制成員的相互作用。Obinutuzumab是首個(gè)獲準(zhǔn)臨床使用的糖工程單抗，與利妥昔單抗相比，增加了對(duì)CD16的親和力，從而誘導(dǎo)更強(qiáng)的NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC作用；②合成雙特異性殺傷接合子（BiKEs）或三特異性殺傷接合子（TriKEs），有效地將NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性導(dǎo)向腫瘤細(xì)胞。 這種小結(jié)構(gòu)（50-75 kDa）通常由一個(gè)抗CD16抗體的單鏈可變片段（scFv）連接到一個(gè)（BiKE）或兩個(gè)（TriKE）腫瘤抗原特異性抗體的scFv。 通過這些結(jié)構(gòu)允許高親和性的CD16+NK細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞連接，從而克服了受體多態(tài)性的局限性，在生物分布、低免疫原性和反應(yīng)速度方面顯示出相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)治療性單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)。如CD16xCD133雙特異性受體具有重要的治療潛力，因?yàn)樗�能夠靶向耐藥CD133+癌癥干細(xì)胞群體。而就像以MDSC為靶點(diǎn)的CD16xCD33雙特異性受體一樣，這些結(jié)構(gòu)的另一個(gè)附加價(jià)值體現(xiàn)在它們能夠誘導(dǎo)NK細(xì)胞殺傷TME中免疫抑制成分；③放大NK細(xì)胞對(duì)CD16參與反應(yīng)的策略。通過配體識(shí)別或mAbs結(jié)合激活NK受體的互補(bǔ)信號(hào)，可能增強(qiáng)NK細(xì)胞效應(yīng)對(duì)治療性mAbs調(diào)理腫瘤細(xì)胞的功能。NK細(xì)胞接合子(NKCEs)，由兩個(gè)靶向NK激活受體NKp46的單抗片段和一個(gè)特定的腫瘤抗原組成，并與一個(gè)優(yōu)化了CD16結(jié)合的Fc片段結(jié)合，被證明可以促進(jìn)腫瘤清除和改善NK細(xì)胞腫瘤浸潤，在小鼠體內(nèi)模型中，這些結(jié)構(gòu)比完整的mAbs更有效；④另一方面，CD16依賴的NK細(xì)胞激活和效應(yīng)功能受MHC-I類特異性和非特異性抑制受體的控制。在臨床前模型中發(fā)現(xiàn)，通過PD-1或TIGIT阻斷NK細(xì)胞中的免疫檢查點(diǎn)，可進(jìn)一步增強(qiáng)曲妥珠單抗和西妥昔單抗觸發(fā)的NK細(xì)胞功能。

四、學(xué)術(shù)論證
2021年8月，Reusing S B等在知名學(xué)術(shù)期刊《Cancer Immunology, Immunotherapy》上發(fā)表了他們關(guān)于CD16XCD33雙抗的研究報(bào)道【3】。
 

急性白血病是兒童中診斷出的最常見的惡性腫瘤，約占兒童癌癥診斷的30%，絕大多數(shù)(80%) 患有急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)，而其余的被診斷為急性髓性白血病(AML)。其中，大約25%的雙表型或雙系A(chǔ)LL表達(dá)髓系特異性抗原CD33，因此，CD33+白血病患者標(biāo)志著一個(gè)高危人群，迫切需要新的策略來促進(jìn)免疫系統(tǒng)克服惡性腫瘤而不增加進(jìn)一步危及生命的毒性。為了更有效地將NK細(xì)胞引導(dǎo)至白血病靶點(diǎn)，研究者設(shè)計(jì)了一種完全人性化的雙特異性殺傷細(xì)胞接合器。

CD16xCD33 BiKE包含兩個(gè)抗體片段，第一個(gè)識(shí)別CD16 (FcγRIII)，第二個(gè)針對(duì)骨髓分化抗原CD33，它們共同觸發(fā)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性。針對(duì)CD33+靶標(biāo)的CD16信號(hào)傳導(dǎo)是NK細(xì)胞特異性的，并且專門針對(duì)CD33+細(xì)胞，因此，抗體通過CD16直接觸發(fā)NK細(xì)胞活化，顯著增加NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。此外，通過這種方式，CD16xCD33 BiKE已被證明有可能克服KIR信號(hào)傳導(dǎo)的抑制作用，并改善NK細(xì)胞介導(dǎo)的成人AML原始細(xì)胞裂解。該研究評(píng)估了CD16xCD33 BiKE是否可以增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)CD33+原發(fā)性兒童ALL和AML細(xì)胞的激活。

2021年9月14日，來自美國明尼蘇達(dá)大學(xué)醫(yī)學(xué)系的Frank Cichocki團(tuán)隊(duì)和Jeffrey S. Miller團(tuán)隊(duì)在Cell Stem Cell雜志上合作發(fā)表了一篇題為 Harnessing features of adaptive NK cells to generate iPSC-derived NK cells for enhanced immunotherapy 的文章【4】，該團(tuán)隊(duì)報(bào)告了一項(xiàng)三基因編輯的iNK細(xì)胞產(chǎn)品，來自巨細(xì)胞病毒血清陽性供體的適應(yīng)性NK細(xì)胞亞群表現(xiàn)出低水平的CD38，高水平的NAD+以及更高的抗氧化應(yīng)激能力�；�于此，一方面可以通過在轉(zhuǎn)導(dǎo)hnCD16的iPSC中敲除CD38來設(shè)計(jì)iNK細(xì)胞（hnCD16/CD38KO iNK）以獲得代謝增益效果，同時(shí)也能避免由治療性抗CD38抗體達(dá)雷木單抗介導(dǎo)的NK細(xì)胞“自相殘殺”行為。這種iADAPT NK即使在沒有外源性細(xì)胞因子的情況下也能在體內(nèi)持續(xù)存在并發(fā)揮作用，并且可以與治療性抗體結(jié)合以增強(qiáng)腫瘤靶向性。