日期 | 時間 | 培訓(xùn)內(nèi)容 | 授課老師 |
11月22日 | 10:00-18:00 | 培訓(xùn)報到 | 劉剛博士 2008年博士畢業(yè)于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院,從事腫瘤干細(xì)胞,細(xì)胞衰老,腫瘤轉(zhuǎn)移等細(xì)胞作用網(wǎng)絡(luò)和通路的研究,并作為骨干研究人員參加了973計劃項目、國家自然科學(xué)基金重點項目、在香港中文大學(xué)做為作為Postdoc和Research fellow,從事研究工作。先后Nature Genetics,cell research、PLOS one等期刊發(fā)表論文十余篇。 |
11月23日 | 9:00-11:30 | 理論講解: 一、基因編輯技術(shù)簡介(三代基因編輯工具) 1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR 二、CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)原理 1. CRISPR/Cas9發(fā)現(xiàn)歷史 2. CRISPR/Cas9作用機制解析 3. CRISPR/Cas9系統(tǒng)改造策略 | |
13:00-17:00 | 理論講解: 一、sgRNA在線設(shè)計構(gòu)建實戰(zhàn)演練(1.靶基因序列查找2.sgRNA在線設(shè)計合成) 二、CRISPR/Cas9轉(zhuǎn)染策略: 1.生物轉(zhuǎn)染(慢病毒、腺相關(guān)病毒等) 2.物理轉(zhuǎn)染 (電轉(zhuǎn)核酸/RNP、顯微注射、基因槍) 3.化學(xué)轉(zhuǎn)染 (脂質(zhì)體、陽離子聚合物) 三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率檢測,脫靶檢測及解決策略 1、高保真Cas9(espCas9、Hifi-Cas9、Cluster1-Cas9) | ||
11月24日 | 9:00-11:30 | 理論講解: 一、CRISPR技術(shù)應(yīng)用解析 1.基因敲除(單基因敲除、多基因敲除、大片段刪除、多靶點sgRNA載體構(gòu)建策略) 2.基因敲入實戰(zhàn)演練(gRNA選擇、同源臂設(shè)計、導(dǎo)入,長片段導(dǎo)入策略/提高基因敲入效率策略,PITCh、HITI) 3.CRISPR在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的應(yīng)用(轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄抑制系統(tǒng)) 4.CRISPR靶基因標(biāo)記定位 二、CRISPR案例解析 1.基因敲除在小鼠模型構(gòu)建、植物、細(xì)胞、細(xì)菌、真菌等中的應(yīng)用案例解析 2.基于CRISPR的全基因組基因敲除高通量篩選策略 3.基于CRISPR的全基因組轉(zhuǎn)錄激活/抑制高通量篩選策略 三、CRISPR/Cas9與基因沉默技術(shù)(siRNA、shRNA)系統(tǒng)比較。 | |
13:00-17:00 | 理論講解: 一、單堿基基因編輯技術(shù)簡介及在基因治療中的應(yīng)用 1.HF2-BE2 2.BE3系統(tǒng) 3.ABE系統(tǒng)4.單堿基基因編輯脫靶克服。 二、基因CRISPR的基因檢測系統(tǒng) 1、CRISPR-Cpf1系統(tǒng)介紹(DETECTR) 2、CRISPR-C2c2系統(tǒng)介紹(SHERLOCK) 三、CRISPR/Cas9系統(tǒng)在腫瘤和遺傳病治療中應(yīng)用解析 1、CRISPR結(jié)合免疫檢查點抑制劑治療腫瘤 2、單基因遺傳病治療(DMD、先天性黑朦、地中海貧血等) 3、CRISPR治療HIV-基因編輯嬰兒解析 |