近日,中國(guó)學(xué)者熟知的PLOS ONE和PLOS Biology在投稿指南里指出,7月1日起,要求所有作者提供WB相關(guān)的原始數(shù)據(jù),并存放在可用的數(shù)據(jù)庫中,提供可查詢的信息。
在《JBC》的作者投稿要求中也需要提供原始數(shù)據(jù)作為評(píng)審的依據(jù)。如果稿件正在審核中,未按照要求提供或拒絕提供這些數(shù)據(jù)的作者的文章將成為拒收理由。
http://www.jbc.org/site/misc/edpolicy.xhtml
在權(quán)威雜志《nature》的要求中,作者可能會(huì)被要求提交原始的,未經(jīng)處理的圖像。https://www.nature.com/nature-research/editorial-policies/image-integrity
以上列舉了幾種期刊關(guān)于提交原始圖像的信息,因?yàn)閃B由于其從原始數(shù)據(jù)到最后成文展示,本身即需要裁減排版,此過程中,造假的空間就會(huì)很大。還有很多知名期刊也有類似的要求,防止WB數(shù)據(jù)造假。
Azure凝膠成像系統(tǒng)提供給客戶最真實(shí)的原始的tiff圖片,而不是經(jīng)過軟件自行修改,編輯的看著好看的圖片,例如插值圖片,插值圖像灰度值有明顯的不連續(xù)性,圖像質(zhì)量損失較大,會(huì)產(chǎn)生明顯的馬賽克和鋸齒現(xiàn)象。自動(dòng)優(yōu)化圖片,軟件類似PS的手法,在形成圖像時(shí)進(jìn)行自動(dòng)優(yōu)化,消除背景等方法,這樣會(huì)使圖片丟失大量信息,影響數(shù)據(jù)的真實(shí)性。
Azure公司秉承實(shí)事求是,尊重科研的態(tài)度,Azure凝膠成像系統(tǒng)提供給客戶最原始的16bit的tiff圖片,tiff是最復(fù)雜的一種位圖文件格式。tiff是基于標(biāo)記的文件格式,它廣泛地應(yīng)用于對(duì)圖像質(zhì)量要求較高的圖像的存儲(chǔ)與轉(zhuǎn)換。由于它的結(jié)構(gòu)靈活和包容性大,它已成為圖像文件格式的一種標(biāo)準(zhǔn)。信息量大,真實(shí)反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
以上和大家說了原始圖片的期刊要求,我們看看關(guān)于定量數(shù)據(jù)的要求:
JBC期刊雜志要求使用總蛋白定量,傳統(tǒng)的單一蛋白會(huì)有潛在的不穩(wěn)定表達(dá)的風(fēng)險(xiǎn),影響定量的準(zhǔn)確性:http://jbcresources.asbmb.org/collecting-and-presenting-data#basics
在《Nature》和《Cell》雜志中鼓勵(lì)在一張印跡膜上進(jìn)行印跡實(shí)驗(yàn),平行膠因?yàn)轶w系和條件的不同會(huì)影響定量的準(zhǔn)確性,熒光方法更符合。《Cell》http://crosstalk.cell.com/blog/common-pitfalls-in-figure-preparation
化學(xué)發(fā)光方法由于其自身的半定量和一次僅能進(jìn)行單一的信號(hào)采集,所以才會(huì)有這么多學(xué)術(shù)造假的文章出現(xiàn),化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的局限性就體現(xiàn)出來了。之后科學(xué)家為了尋求解決方法,熒光western blot檢測(cè)應(yīng)運(yùn)而生。
熒光Western blot使用熒光染料標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè),膜上的靶標(biāo)蛋白濃度與可見熒光信號(hào)強(qiáng)度呈線性關(guān)系,實(shí)現(xiàn)真實(shí)可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同,因此在一張印跡膜上可實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)。在無需剝離和二孵育條件下,進(jìn)行上樣量質(zhì)控,可以分析翻譯后修飾蛋白。
因此當(dāng)您進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)室,選擇熒光檢測(cè)方法,妥妥的:
> 同時(shí)檢測(cè)多種蛋白
> 研究翻譯后修飾蛋白
> 同一印跡膜的上樣質(zhì)控
> 精確定量western blot實(shí)驗(yàn)
綜上所述,采用現(xiàn)在動(dòng)態(tài)范圍更寬的多重?zé)晒鈝estern blot檢測(cè)方法來進(jìn)行western blot檢測(cè),實(shí)現(xiàn)真正的定量要求,無需剝離膜和二次孵育,進(jìn)行上樣質(zhì)控,目標(biāo)蛋白和內(nèi)參蛋白在同一張膜上,就不會(huì)發(fā)生和避免上面數(shù)據(jù)造假的情況發(fā)生,更容易被期刊雜志接收。
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