針對(duì)生物制品（重組疫苗、治療性抗體、重組蛋白）中宿主細(xì)胞殘留蛋白（HCP）檢測(cè)方法的可靠性驗(yàn)證，伯樂生命（Bio-Rad Laboratories）發(fā)布了基于2D及Western Blot技術(shù)的宿主蛋白殘留檢測(cè)方法驗(yàn)證方案，用以評(píng)估HCP定量試劑盒中多克隆抗體的特異性。生物制品中的宿主細(xì)胞殘留蛋白會(huì)導(dǎo)致過敏反應(yīng)或潛在毒性等不良臨床反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。因此必須建立合適的HCP檢測(cè)驗(yàn)證方法來嚴(yán)格控制生物制品的質(zhì)量。

 

ELISA是目前應(yīng)用最廣泛的HCP檢測(cè)方法。該技術(shù)相對(duì)簡單、精度良好，方便設(shè)定控制范圍和建立技術(shù)規(guī)范。«中華人民共和國藥典»2010年版三部中的HCP檢測(cè)均是要求采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定。在該檢測(cè)方法中， 用存在于生物制品中的HCP作為免疫原生產(chǎn)出的抗體質(zhì)量至關(guān)重要。目前生物制品行業(yè)多以商業(yè)化的通用型HCP ELISA試劑盒來檢測(cè)產(chǎn)品中的宿主蛋白殘留（如Cygnus Technologies）。但宿主細(xì)胞的分泌型蛋白和部分死亡細(xì)胞釋放的結(jié)構(gòu)蛋白成分復(fù)雜，不同的工藝，加上相關(guān)基因產(chǎn)物需要經(jīng)過獨(dú)特的翻譯后修飾，這些都大大增加了HCP的數(shù)量和生化復(fù)雜性。因此，通用型HCP ELISA試劑盒中的多克隆抗體對(duì)宿主蛋白的特異性問題很難進(jìn)行評(píng)估。若商品化ELISA試劑盒中的多克隆抗體特異性和適用性不夠高，則會(huì)帶來漏檢HCP的風(fēng)險(xiǎn)，從而對(duì)生物制品質(zhì)量安全帶來風(fēng)險(xiǎn)。

         

 

來自于Bio-Rad Laboratories的科學(xué)家使用此流程成功驗(yàn)證了某一ELISA試劑盒對(duì)于不同CHO細(xì)胞系HCP檢測(cè)的適用性差異。從以下兩個(gè)結(jié)果來看，即使是相同的ELISA試劑盒，其多克隆抗體對(duì)不同CHO細(xì)胞系的總蛋白覆蓋率有很大差別（46%與20%）。顯然，對(duì)于第二個(gè)CHO細(xì)胞系所表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)品，使用該ELISA試劑盒測(cè)定HCP殘留會(huì)導(dǎo)致較大的數(shù)據(jù)偏差。

      

Bio-Rad Laboratories發(fā)布的HCP殘留檢測(cè)驗(yàn)證流程雖然以2D為基礎(chǔ)，但是該流程使用同一張膜上的總蛋白數(shù)據(jù)與Western Blot數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所以很好的避免了2D實(shí)驗(yàn)重復(fù)性對(duì)結(jié)果的影響，保證了數(shù)據(jù)的重復(fù)性與可靠性。在2013年WCBP論壇上FDA官員也明確了用于檢測(cè)HCP殘留的抗血清（多克隆抗體）一定要經(jīng)過驗(yàn)證，而2D法被認(rèn)為是最為合適的驗(yàn)證抗血清方法。