很多同學(xué)在課題進(jìn)展到一定狀態(tài)后，都會需要小鼠來開展后續(xù)實驗。但面對著珍貴實驗鼠鼠時，新晉鏟屎官們常常手足無措，無從下手。小鼠狀態(tài)越來越差不說，甚至出現(xiàn)斷種的情況。

既然想要成為一個合格的鏟屎官，就該盡早做好準(zhǔn)備。今天鼠博士就給大家講述引進(jìn)小鼠時需考慮的幾大問題。建議每個新晉鏟屎官都收藏一下~
 

• 明確小鼠背景：常見近交系小鼠品系有C57BL/6（毛色為黑色） 、BALB/c（毛色為白色）、FVB（毛色為白色）、ICR（毛色為白色）等

• 明確小鼠類型：小鼠為野生型小鼠、無菌鼠還是基因編輯小鼠，小鼠免疫系統(tǒng)是否健全等。

確定小鼠飼養(yǎng)環(huán)境：

• 詢問小鼠來源機(jī)構(gòu)（實驗室/供應(yīng)商）小鼠合適飼養(yǎng)環(huán)境。根據(jù)國務(wù)院批準(zhǔn)的《實驗動物管理條例》，按照相應(yīng)的微生物控制標(biāo)準(zhǔn)，實驗動物分為四級：一級，普通級動物 conventional (CV) animal；二級，清潔級動物clean (CL) animal；三級，無特定病原體級動物specific pathogen free (SPF) animal；四級，無菌級動物germ free (GF) animal。

• 確認(rèn)小鼠合適飼養(yǎng)環(huán)境后，聯(lián)系動物房/動物中心詢問相應(yīng)等級小鼠如何引進(jìn)，按照不同單位各自流程辦理引入外來小鼠流程。

• 根據(jù)引入小鼠類型與數(shù)量，提前準(zhǔn)備好合適的籠位數(shù)

水和食物的供應(yīng)：

• 根據(jù)小鼠與實驗需求，準(zhǔn)備好合適的飼料與水。

• 飼料：常規(guī)小鼠使用常規(guī)生長繁殖飼料即可（脂肪含量為6％），其他特殊情況視情況而定。飼料需滅菌，滅菌方式可選擇高溫高壓滅菌、輻照滅菌等。

• 飲用水：可使用pH2.5-3.0的酸化水、高壓無菌水、純化水等。

 

引進(jìn)小鼠時：
確定小鼠基本信息：

• 了解小鼠編號標(biāo)記的方法，便于準(zhǔn)確辨認(rèn)小鼠：
  (1) 斷趾編號法：斷趾法是最常見的編號方法，根據(jù)對新生小鼠前肢 4 趾，后肢 5 趾的切斷位置來進(jìn)行編號。
  (2) 耳標(biāo)法：用專門的耳孔機(jī)在小鼠耳朵上打孔或造成缺口，或者用剪刀在耳朵邊緣剪出不同的缺口進(jìn)行編號。
  (3) 染色法：用毛筆或棉簽蘸取化學(xué)藥品，在實驗動物體表不同部位涂上斑點(diǎn)，以示不同編號。常用染液有：3–5% 的苦味酸溶液（黃色）；0.5% 的中性品紅溶液（紅色）；2% 的硝酸銀溶液（咖啡色）。

• 檢測小鼠編號、數(shù)量、性別、周齡、基因型等基本信息是否與標(biāo)簽相符。

觀察小鼠基本情況：

• 皮毛：有無光澤、豎毛、出血、污物、脫毛。
• 眼：有無分泌物、流淚、白內(nèi)障、角膜損傷。
• 口腔：有無流涎、出血。
• 耳：有無外傷、耳殼曲折、耳部炎癥。
• 四肢：有無外傷、彎曲、脫臼、腫脹、關(guān)節(jié)炎癥。
• 肛門：有無排泄殘留物、血便、脫肛。
• 精神和食欲：沉默、倦怠、動作不活潑、食欲不振、拒食。
• 營養(yǎng)狀況：消瘦、過度肥胖、成長異常。
• 姿勢和步態(tài)：姿勢異常、行走和站立困難、運(yùn)動失調(diào)、跛行。

穩(wěn)定小鼠狀態(tài)：

• 小鼠在引入后需經(jīng)過環(huán)境適應(yīng)期3-5天后，方可進(jìn)行實驗操作。
• 盡量減少噪音、振動、氣味干擾，輔助小鼠盡快適應(yīng)新環(huán)境。

復(fù)核小鼠基因型

• 詢問小鼠來源機(jī)構(gòu)（實驗室/供應(yīng)商）小鼠基因型具體檢測方案，購買相應(yīng)試劑
• 將引進(jìn)小鼠剪尾，復(fù)核基因型，明確小鼠信息，同時檢驗基因檢測方案是否可行。

引進(jìn)小鼠后：
明確目前實驗需求

• 需要快速使用小鼠進(jìn)行實驗（訂購野生型、動物造模模型或大量單一基因型小鼠）
• 需要大量獲得某種基因型小鼠，小鼠處于被積極使用狀態(tài)。（訂購繁殖對自行繁殖）
• 需要維持品系但不擴(kuò)大其規(guī)模，小鼠處于維持狀態(tài)。

設(shè)計繁育策略并制定種群管理計劃

• 向小鼠來源機(jī)構(gòu)（實驗室/供應(yīng)商）了解小鼠繁育特征。小鼠的基本繁育信息可見下表：

• 繁育策略設(shè)定：根據(jù)基因小鼠的類型，參考下面方式，制定繁育籠配繁策略。

（更詳細(xì)的繁育攻略，可閱讀往期推文：【小鼠大學(xué)問】養(yǎng)小鼠你要知道的那些事（三）：基因工程小鼠繁育方案）

• 種群管理計劃制定：根據(jù)實驗小鼠是被積極使用狀態(tài)還是維持狀態(tài)制定繁育籠數(shù)

若小鼠是被積極使用狀態(tài)，盡量使目標(biāo)基因型的比率保持在 1/8 (12.5%) 或更高，并且根據(jù)小鼠所需數(shù)量，結(jié)合懷孕率、 產(chǎn)仔數(shù)、 性別、基因偏差等因素計算出所需籠位數(shù)。

若小鼠是維持狀態(tài)，保持至少兩代小鼠，每代包括兩到三對姐妹兄弟的繁殖。在新一代的小鼠被證明有生育能力之前，不要淘汰任何年老繁殖對。并且需要密切監(jiān)測繁育性能。除此之外，可考慮對實驗所用小鼠品系進(jìn)行冷凍保存，便于保存遺傳特性，避免育種失敗等問題發(fā)生。

小鼠繁育Tips：
根據(jù)繁育策略建立好繁育籠后，還是會出現(xiàn)各種各樣的問題影響小鼠繁育，遇到問題時可參考下表進(jìn)行改善：

記錄種群信息：
開始飼養(yǎng)小鼠后，小鼠的信息記錄對于種群管理非常重要，主要在于籠卡與飼養(yǎng)記錄表。

• 籠卡分為飼養(yǎng)籠與繁殖籠，兩者包含信息見下表：

參考如下

 

• 飼養(yǎng)記錄：

除了籠卡以外，我們還要用表格把所有的小鼠情況匯總記錄下來，可以包括小鼠的編號、出生日期、代次、性別、基因型信息、親代小鼠信息、交配日期、目前狀態(tài)、體重信息等等，便于統(tǒng)計與管理。

小鼠基因型鑒定
小鼠基因組鑒定也是常常困擾新晉鏟屎官的點(diǎn)，鼠博士這邊的建議是，首先按照小鼠來源機(jī)構(gòu)（實驗室/供應(yīng)商）小鼠基因型具體檢測方案來執(zhí)行，若還有一些問題，可以參考下表進(jìn)行改進(jìn)。

希望這篇文章可以對新晉鏟屎官的你能有所幫助，不用走太多彎路！如果您還有這方面的疑問，隨時歡迎您聯(lián)系我們！

關(guān)于我們
上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，簡稱"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科創(chuàng)板上市高科技生物公司（股票代碼：688265），始終以編輯基因、解碼生命為己任，專注于模式生物領(lǐng)域，打造了以基因修飾動物模型研發(fā)為核心，涵蓋多物種模型構(gòu)建、飼養(yǎng)繁育、表型分析、藥物臨床前評價等多個技術(shù)平臺，致力于為全球高校、科研院所、制藥企業(yè)等客戶提供全方位、一體化的基因修飾動物模型產(chǎn)品解決方案。