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                                短串聯(lián)重復(fù)序列STR(Short Tandem Repeat)鑒定科普

                                瀏覽次數(shù):846 發(fā)布日期:2024-7-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
                                1,STR簡介:
                                STR(Short Tandem Repeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)基因位點(diǎn)由長度為3~7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成 ,這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中,可作為高度多態(tài)性標(biāo)記,被稱為細(xì)胞的DNA指紋。
                                2,生產(chǎn)流程:
                                STR的生產(chǎn)流程主要包括,樣本收集,DNA抽提,毛細(xì)管凝膠電泳,數(shù)據(jù)導(dǎo)出和報(bào)告分析,其中比較重要的在于實(shí)驗(yàn)操作過程中的污染質(zhì)控,以及后續(xù)的報(bào)告解讀部分。對于需要做申報(bào)的公司,運(yùn)行數(shù)據(jù)的保存也是相當(dāng)重要的。
                                 
                                圖1,STR整體質(zhì)控流程
                                3,鑒定標(biāo)準(zhǔn)和位點(diǎn):
                                參考美國國家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(American National Standard Institute,ANSI) 標(biāo)準(zhǔn):STR Loci (minimum set)TH01, TPOX, vWA, CSF1PO, D16S539, D7S820, D13S317, and D5S818 Gender marker Amelogenin,采用ATCC公布細(xì)胞鑒定金標(biāo)準(zhǔn)8位點(diǎn)+1個性別位點(diǎn),后續(xù)11個高度多態(tài)性位點(diǎn)輔佐判斷。
                                 
                                圖2,STR位點(diǎn)信息
                                4,完整的報(bào)告結(jié)果:
                                涵蓋一個陽性樣本質(zhì)控峰圖結(jié)果,數(shù)據(jù)庫比對表,標(biāo)準(zhǔn)的STR鑒定報(bào)告,毛細(xì)管凝膠電泳測序峰圖。其中,陽性質(zhì)控是比較重要的,能確保實(shí)驗(yàn)操作過程中的污染判別,排查實(shí)驗(yàn)操作人員或者環(huán)境中的污染結(jié)果。
                                圖3,完整的STR報(bào)告結(jié)果
                                5,質(zhì)量管理體系:
                                上海翼和STR嚴(yán)格依據(jù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):ISO9001質(zhì)量管理體系,CMA司法鑒定標(biāo)準(zhǔn),建立了完整的質(zhì)量管理體系,從試劑耗材,到實(shí)驗(yàn)操作,數(shù)據(jù)監(jiān)控等方面監(jiān)控實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)產(chǎn)出,確保數(shù)據(jù)的真實(shí)性及可靠性。
                                 
                                圖4,質(zhì)量管理體系
                                 
                                6,數(shù)據(jù)庫比對:
                                目前比較常用的數(shù)據(jù)庫包括,美國ATCC細(xì)胞庫,德國DSMZ細(xì)胞庫,日本JCRB細(xì)胞庫,日本Riken細(xì)胞庫,國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺,EXPASY數(shù)據(jù)庫結(jié)果。翼和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),通過自動檢索軟件,對比德國DSMZ細(xì)胞數(shù)據(jù)庫結(jié)果,后續(xù)人員復(fù)核依照21位點(diǎn)結(jié)果,比對EXPASY數(shù)據(jù)庫,國家實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源共享平臺數(shù)據(jù)作為補(bǔ)充,復(fù)查數(shù)據(jù)結(jié)果。
                                 

                                圖5,數(shù)據(jù)庫比對結(jié)果
                                7,判讀標(biāo)準(zhǔn):
                                匹配度(EV值)計(jì)算公式:=匹配度(%)
                                EV值≥1.0,細(xì)胞完全匹配參考細(xì)胞結(jié)果。
                                0.8≤EV值<1.0,細(xì)胞基本匹配參考細(xì)胞結(jié)果,基本匹配往往伴隨多等位的結(jié)果,需要參考21位點(diǎn)的結(jié)果來判讀是否是交叉污染,還是細(xì)胞微衛(wèi)星不穩(wěn)定導(dǎo)致的。
                                EV值<0.8,細(xì)胞不匹配。
                                8,增值服務(wù):
                                • 基于QPCR方法的4種屬鑒定結(jié)果,往往是人和小鼠STR鑒定體系檢測不到信號值的情況下,免費(fèi)幫客戶補(bǔ)測種屬。確保種屬來源正確,或者排查其他種屬源細(xì)胞污染的情況。4種屬涵蓋:人,小鼠,大鼠,倉鼠,4個物種。
                                • 10種屬鑒定結(jié)果:QPCR原理的種屬檢測服務(wù),后續(xù)根據(jù)客戶意愿決定是否需要排查4種屬外的其他物種結(jié)果。
                                • 英文報(bào)告:部分公司或者科研單位,尤其發(fā)表論文的老師,需要提供報(bào)告的英文報(bào)告用于發(fā)表論文。可以聯(lián)系對應(yīng)銷售人員安排免費(fèi)出具英文報(bào)告結(jié)果。
                                • 為期至少一年的數(shù)據(jù)保留,和半年的客戶樣本保留。
                                9,STR應(yīng)用場景:
                                1. 常見永生化細(xì)胞的鑒定,論文發(fā)表和公司細(xì)胞庫建庫。
                                2. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中的交叉污染情況排查。
                                3. 干細(xì)胞來源一致性比對。
                                4. 自主的原代細(xì)胞建立,排查污染和原始數(shù)據(jù)保留。
                                10,參考文獻(xiàn):
                                1,A resource for cell line authentication, annotation and quality control Nature 520,307–311(16 April 2015)
                                2,Cell line misidentification:the beginning of the end Nature Reviews Cancer 10, (June 2010)
                                3,American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer, 2010. 10(6):p. 441-8.
                                4,Reid Y, Storts D, Riss T, Minor L. Authentication of Human Cell Lines by STR DNA Profiling Analysis. Assay Guidance Manual [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004-.2013 May 1.
                                 
                                來源:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司
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