近十年來，溶解微針陣列 （Dissolving microneedle arrays，dMNAs）用于透皮接種疫苗已取得極大發(fā)展。與傳統(tǒng)的肌肉注射和皮下注射相比，dMNAs可誘導(dǎo)相似或更高水平的免疫反應(yīng)，同時(shí)溶解在微針中的抗原疫苗更穩(wěn)定，無需冷鏈運(yùn)輸，可自行完成接種，減少醫(yī)療系統(tǒng)壓力。

目前，dMNAs主要通過抗原和構(gòu)成微針的聚合物混合，澆筑模型后離心的方式制備。然而，該制備過程中的微針陣列背板中，存在大量的抗原殘留，成本的增加限制了dMNAs技術(shù)的應(yīng)用。

荷蘭萊頓大學(xué)萊頓藥物研究中心的一個(gè)研究團(tuán)隊(duì)于2021年在《International Journal of Pharmaceutics》雜志發(fā)表了一篇名為《Engineering of an automated nano-droplet dispensing system for fabrication of antigen-loaded dissolving microneedle arrays》的文章。在該研究中，研究團(tuán)隊(duì)使用自動(dòng)納升分液技術(shù)開發(fā)了一種新的dMNA制備工藝，不但保留了原有dMNA的優(yōu)勢，而且極大提升了抗原使用效率，大大降低了透皮接種疫苗成本。

實(shí)驗(yàn)流程與結(jié)果

以聚乙烯吡咯烷酮/聚乙二醇（PVP/PEG）、聚乙烯醇（PVA）、透明質(zhì)酸 （HA）、羧甲基纖維素 （CMC）和明膠作為微針聚合物的候選材料，利用傳統(tǒng)離心法制備dMNA，根據(jù)制備dMNA的熱穩(wěn)定性、脆性、粘度等因素篩選最為合適的聚合物候選材料。
測試結(jié)果表明，除部分配方不適合制備微針（如 3.25% （w/v）的 PVP/PEG會(huì)導(dǎo)致微針過脆而斷裂，50% （w/v） PVA的粘度太高無法澆筑在模具上）外，其余均進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

利用離體人體皮膚，測試上述不同配方制備的dMNAs穿透效果和溶解效果。

滲透實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所有選定的dMNAs在人體腹部皮膚中都顯示出優(yōu)異的滲透效率，即使穿透效果最低的40% （w/v） 明膠 dMNAs，其穿透效果也達(dá)到了91.7,%，表明一個(gè)9微針的陣列中至少有8個(gè)針可以穿透皮膚。

溶解實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在透皮5分鐘后，不同材質(zhì)的dMNAs溶解效率有較大差別，其中溶解效果最好的是6.5% （w/v） PVP/PEG。溶解的越充分，疫苗利用率越高，因此選用該材料作為后續(xù)微針制備的標(biāo)準(zhǔn)配方。

在選定聚合物候選材料后，研究團(tuán)隊(duì)搭建了一套全自動(dòng)納米分液裝置，其核心部件——德國Biofluidix公司的Pipejet全自動(dòng)納升分液器。Pipejet可以轉(zhuǎn)移小至2nL的液滴，將其加入14nl的微針腔體內(nèi)。該系統(tǒng)以Pipejet為核心，配套質(zhì)控相機(jī)、真空室、XYZ移動(dòng)平臺等設(shè)備搭建完成。（圖1）

圖1 用于 dMNAs 制備的自動(dòng)系統(tǒng)示意圖（a）Pipejet納升分液器，（b）點(diǎn)樣器支架，（c）數(shù)碼顯微鏡相機(jī)，（d）鋁棒，（e）線性平臺，（f）真空室，（g）真空泵，（h） 將PDMS模具放置在真空室的頂部（分配器和載物臺均由軟件Python操作）
微針制備過程：1）將聚合物溶液澆筑在構(gòu)建好的微針模具中，制成具有空腔的微針；2）將代替抗原的熒光標(biāo)記卵清蛋白通過Pipejet加入微針空腔；3）利用離心和負(fù)壓排除空氣，制成微針。

 

離體人體的皮膚測試效果表明，新方法制備的微針在穿透率和溶解效率上，與已有方法即全程離心法制備的微針相似（圖2）。但是，新方法的抗原只存在在微針處，且2nl抗原就可制備一個(gè)dMNAs，對比全程離心法需要90ul抗原，大大節(jié)省了抗原成本。

圖2.熒光標(biāo)記的卵清蛋白負(fù)載微針的顯微鏡圖像（a） 在皮膚穿透前含有 AF647 標(biāo)記卵清蛋白的微針，（b） 100% 的皮膚穿透效率 （n = 4）， 表明微針具有足夠的鋒利度和機(jī)械強(qiáng)度，卵清蛋白的成功遞送可從（c）穿透皮膚的熒光中顯示，（d） 5 分鐘和 （e） 15 分鐘溶解后剩余微針的明場顯微鏡圖像，f）溶解15分鐘后剩余微針的熒光顯微鏡圖像

綜上所述，納升分液自動(dòng)化制備的微針，其效果與傳統(tǒng)離心法相似，但大大降低了抗原損耗和成本，可進(jìn)入更大范圍的工業(yè)推廣。

更多資訊請?jiān)L問文獻(xiàn)全文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.ijpharm.2021.120473

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