組織和細(xì)胞樣本是生物學(xué)中蛋白質(zhì)或RNA表達(dá)分析的主要樣本來(lái)源,幫助我們理解細(xì)胞有什么特征、如何相互作用、如何組織并驅(qū)動(dòng)各種生物功能;诳乖-抗體結(jié)合的基本原理,利用熒光標(biāo)記的免疫熒光技術(shù)(IF)已成為轉(zhuǎn)化和基礎(chǔ)研究的重要方法。
盡管傳統(tǒng)的免疫熒光技術(shù)在組織病理學(xué)診斷中被廣泛使用,但其局限性(如觀察者之間的高度可變性和每個(gè)組織切片只能標(biāo)記一個(gè)標(biāo)記物的能力),阻礙了快速的high-plex分析。為了規(guī)避這些限制,多重免疫熒光技術(shù)的出現(xiàn)使得從單個(gè)組織切片中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)標(biāo)記物成為可能,并應(yīng)用于細(xì)胞組成、細(xì)胞功能和細(xì)胞-細(xì)胞相互作用等的全面研究。
多重免疫熒光技術(shù),由于其快速,準(zhǔn)確,可量化,包含原位信息的特點(diǎn),成為了腫瘤空間多組學(xué)中的一項(xiàng)重要技術(shù)手段。已發(fā)表的空間組學(xué)研究高分文獻(xiàn)中也多次出現(xiàn)多重免疫熒光的身影。
⏩ Spatiotemporal Immune Landscape of Colorectal Cancer Liver Metastasis at Single-Cell Level(IF=39.40)
⏩ Spatially resolved multi-omics single-cell analyses inform mechanisms of immune-dysfunction in pancreatic cancer(IF=33.883)
⏩ Spatial transcriptomics delineates molecular features and cellular plasticity in lung adenocarcinoma progression(IF=33.5)
⏩ Identification of a tumour immune barrier in the HCC microenvironment that determines the efficacy of immunotherapy(IF=30.083)
隨著技術(shù)的不斷發(fā)展,高通量多重染色已不僅僅只單獨(dú)用來(lái)標(biāo)注幾種不同細(xì)胞類型的特征蛋白表達(dá)與空間分布,還能結(jié)合起來(lái)其他的技術(shù)手段,能高通量地進(jìn)行空間區(qū)域的RNA和蛋白檢測(cè)和定量。
GeoMx® DSP與CosMx™ SMI
GeoMx® DSP就是一個(gè)先進(jìn)多重組織成像和空間多組學(xué)平臺(tái),它將標(biāo)準(zhǔn)免疫熒光技術(shù)與寡核苷酸條形碼技術(shù)相結(jié)合,使研究人員能夠快速表征組織形態(tài),同時(shí)對(duì)各種樣品類型(特別是FFPE組織切片)的RNA和蛋白質(zhì)進(jìn)行空間分析。
該技術(shù)平臺(tái)將分子條形碼寡核苷酸標(biāo)簽用可光切割的紫外光敏感連接劑與抗體或RNA探針結(jié)合。然后將這些標(biāo)記的探針雜交到組織切片上,并用熒光形態(tài)標(biāo)記物染色,以識(shí)別組織的形態(tài)特征(多種免疫熒光識(shí)別特定細(xì)胞類型)。識(shí)別的形態(tài)特征有助于選擇要分析的區(qū)域。然后用紫外光激發(fā)選定的區(qū)域,觸發(fā)從組織表面提取的寡核苷酸標(biāo)簽的釋放,使樣品能夠重復(fù)使用。然后使用NGS對(duì)寡核苷酸標(biāo)簽進(jìn)行定量分析,并將其映射回組織位置,以便在選定的感興趣區(qū)域進(jìn)行空間分析。
而SMI則是對(duì)DSP的補(bǔ)充,結(jié)合了靈敏的循環(huán)原位雜交化學(xué)和超高分辨率成像讀出元件。SMI能夠?qū)崿F(xiàn)mRNA轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)的單細(xì)胞和整個(gè)組織切片的亞細(xì)胞分辨率水平。
SMI是探索使用DSP進(jìn)行全轉(zhuǎn)錄組分析下游問(wèn)題的理想選擇,因?yàn)檫@兩個(gè)技術(shù)平臺(tái)可以在同一研究中用于互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。DSP和SMI可以一起應(yīng)用于許多研究,如生成細(xì)胞/組織圖譜,組織表型或研究生物學(xué)中的問(wèn)題,如研究細(xì)胞-細(xì)胞相互作用,細(xì)胞過(guò)程和生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)。
SBC先后搭建GeoMx® DSP和CosMx™ SMI兩大空間組學(xué)研究平臺(tái),并與NanoString攜手共建DSP空間組學(xué)“卓越中心”,搭配10x Visium Cytassist以及LCM+timsTOF Pro 4D非靶向深度空間蛋白組平臺(tái),打造空間生物學(xué)全鏈條創(chuàng)新多組學(xué)平臺(tái)及解決方案,助力科學(xué)發(fā)現(xiàn)。