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                                當前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 超微量測定蛋白核酸含量的應(yīng)用方案

                                超微量測定蛋白核酸含量的應(yīng)用方案

                                瀏覽次數(shù):493 發(fā)布日期:2023-7-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
                                實驗原理
                                測蛋白質(zhì)含量的原理
                                由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵,因此蛋白質(zhì)有吸收紫外線的性質(zhì),吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi),蛋白質(zhì)溶液的光吸收值( A280)與其含量成正比關(guān)系,可用作定量測定。

                                測核酸含量的原理
                                核酸及其衍生物,核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì),其吸收高峰在260nm波長處。DNA濃度( ug/ml) =A260/0.024/L*稀釋倍數(shù)(L為比色池厚度1cm)

                                儀器及試劑
                                UL-1000超微量紫外可見分光光度計
                                標準蛋白溶液。結(jié)晶牛血清蛋白,預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據(jù)其純度配制成1mg/ml蛋白溶液。
                                待測蛋白溶液
                                核酸溶液

                                操作步驟
                                繪制標準曲線
                                按下表分別向每支試管加入各種試劑,搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯,在280nm波長處分別測定各管溶液的0A280值。以A280值為縱坐標,蛋白質(zhì)濃度為橫坐標,繪制標準曲線。
                                 
                                樣品測定
                                取待測蛋白質(zhì)溶液1ml,加入蒸餾水3ml,搖勻,按上述方法在280nm波長處測定光吸收值,并從標準曲線上查出待測蛋白質(zhì)的濃度。
                                取待測核酸溶液1ml,加入蒸餾水3ml,測定核酸的濃度。

                                實驗結(jié)果
                                測得的八個試管中溶液的A值如圖所示
                                蛋白質(zhì)樣品的A值為0.063
                                核酸樣品的A值為0.039

                                蛋白質(zhì)含量
                                根據(jù)方程當A=0. 063時,0. 0630=0. 6123c+0. 0070.
                                C=0.0945mg/ml .
                                因為溶液稀釋了4倍,所以樣品蛋白的濃度為
                                0.0945*4=0. 378mg/ml

                                核酸含量
                                DNA濃度= A260/0.024/L*稀釋倍數(shù)
                                =0.039/0.024/1*4
                                =7.8 ug/ml
                                 
                                來源:上海美析儀器有限公司
                                聯(lián)系電話:400-6164686
                                E-mail:wuhua@macylab.cn

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