自動釀酒綜合征(Auto-brewery syndrome ,ABS)，也被稱為腸道發(fā)酵綜合征，是指病人在攝入無酒精高碳水化合物飲食后產(chǎn)生醉酒的狀況。首個ABS病例報道于1894年的法國，此后不斷有ABS患者被發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)認為其中相關(guān)微生物主要為真菌Candida spp.（念珠菌屬）和Saccharomyces spp.（酵母菌屬）。

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，正常情況下，細胞代謝會產(chǎn)生少量內(nèi)源性乙醇作為中間體或產(chǎn)物。在結(jié)腸的厭氧條件下，碳水化合物衍生的丙酮酸可以被代謝成乙醛，然后乙醛被還原成乙醇。這一過程有利于腸道細菌或酵母的過度生長和碳水化合物的過度消耗，由此產(chǎn)生的內(nèi)源性乙醇被腸道和肝臟酒精脫氫酶(Adh)、過氧化氫酶和微粒體乙醇氧化系統(tǒng)迅速且?guī)缀跬耆�地從血液中清除。然而，�?dāng)內(nèi)源性乙醇超過腸道和肝臟的代謝能力時，就會在體內(nèi)積累，導(dǎo)致血液酒精濃度(BAC)升高，進而發(fā)生ABS。

2023年4月，首都兒科研究所的袁靜研究員、北京微生物流行病研究所的楊瑞馥教授、北京朝陽醫(yī)院的王晶教授及團隊在eBioMedicine（IF=11.1）期刊發(fā)表一項題為“Three Klebsiella species as potential pathobionts generating endogenous ethanol in a clinical cohort of patients with autobrewery syndrome: a case control study”的病例對照研究，通過多組學(xué)分析ABS患者腸道菌群特征及其與患者血液乙醇濃度的動態(tài)變化，證實克雷伯菌屬產(chǎn)生的過量內(nèi)源性乙醇是導(dǎo)致細菌性ABS的主要病因，聯(lián)合使用抗生素、復(fù)方益生菌制劑及低碳水化合物飲食的治療策略可有效緩解ABS。（麥特繪譜提供非靶向代謝組學(xué)檢測分析）

研究團隊此前報道一例抗真菌治療無效的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)伴ABS的患者，并從患者中分離到高產(chǎn)酒精(HiAlc)的肺炎克雷伯菌，研究人員推斷HiAlc肺炎克雷伯菌是細菌性ABS的致病因子，靶向腸道菌群針對性使用抗生素可有效控制真菌治療無效的ABS患者的臨床癥狀。本研究通過臨床隊列研究驗證該菌在ABS的發(fā)生和發(fā)展中的作用機制。

腸道菌群及代謝組學(xué)分析

本研究納入5名ABS患者和5名健康對照（HC）。糞便宏基因組學(xué)分析顯示，與HC組比，ABS患者的腸道菌群失調(diào)，厚壁菌門豐度降低，變形菌門豐度增加，其中克雷伯菌屬的豐度與患者血液中的乙醇濃度波動密切相關(guān)。非靶向代謝組學(xué)分析（麥特繪譜提供服務(wù)）篩選到77種差異代謝物，其中許多神經(jīng)遞質(zhì)和特定代謝物（如γ-氨基丁酸、多巴、5-羥多巴胺、2,3-丁二醇、鵝去氧膽酸、酪氨酸、苯丙氨酸、苯甲醇、色氨酸和腐胺）在ABS發(fā)作時顯著增加；相反，血清素和石膽酸的豐度降低。這些結(jié)果表明，神經(jīng)遞質(zhì)類物質(zhì)通過腸-腦軸介導(dǎo)的患者情緒發(fā)生變化類似于酒精中毒。

圖1. ABS患者與健康對照的腸道菌群和代謝物比較分析

腸道菌群與BAC的動態(tài)變化及相關(guān)性

收集發(fā)病次數(shù)最多的ABS-2患者在不同時期（特別是治療期間）的樣本進行血液酒精濃度監(jiān)測和糞便宏基因組學(xué)分析，結(jié)果顯示，該患者每次發(fā)病時的BAC達到300-400mg/dL(65 mmol/L- 87 mmol/L，相當(dāng)于15杯酒精含量為40%的威士忌)。通過飲食控制和益生菌干預(yù)措施后，該患者前期暫時性改善，隨后逐漸恢復(fù)原狀。進一步分析發(fā)現(xiàn)腸桿菌科的5個菌屬的分布與BAC波動密切相關(guān)，包括克雷伯菌、大腸桿菌、志賀氏桿菌、沙門氏菌和腸桿菌，當(dāng)BAC 在發(fā)病狀態(tài) (S2) 期間達到 400 mg/dL時，幾乎是發(fā)病前樣本或健康對照樣本的60倍。隨后對糞便樣本分離到的5種菌屬的細菌進行產(chǎn)乙醇能力檢測，發(fā)現(xiàn)HiAlc克雷伯菌屬的產(chǎn)乙醇能力最高，說明克雷伯菌可能是ABS的潛在致病因素。

圖2. 患者腸道菌群與血液酒精濃度的相關(guān)性

體內(nèi)體外實驗證實HiAlc克雷伯菌通過產(chǎn)生內(nèi)源性乙醇促進ABS的發(fā)生

首先通過發(fā)酵培養(yǎng)檢測ABS患者腸道不同部位灌洗液的乙醇濃度，結(jié)果顯示在腸道灌洗液中檢測到高濃度乙醇，同時存在克雷伯菌，其在高濃度酒精的部位豐度更高。進一步從ABS-2患者的小腸、結(jié)腸和糞便中分離出 17 株 HiAlc 克雷伯菌，選取產(chǎn)酒精能力最強的三種菌株進行生理特性分析，發(fā)現(xiàn)這些菌株具有透明的莢膜、較強的生物膜形成能力，以及更快的生長速度。培養(yǎng)實驗表明，這些菌株的產(chǎn)乙醇能力與碳源和環(huán)境氧氣條件有關(guān)。

隨后建立了家兔腸道培養(yǎng)模型以驗證HiAlc克雷伯菌在體內(nèi)能否產(chǎn)生酒精。結(jié)果顯示，在每個菌株培養(yǎng)4小時后，家兔腸道內(nèi)、結(jié)腸粘液和體外培養(yǎng)的乙醇濃度相當(dāng)，與標準菌株ATCC 2146相比，所有三株HiAlc克雷伯菌在體內(nèi)都具有較強的產(chǎn)乙醇能力。進而一步構(gòu)建小鼠模型證實HiAlc克雷伯菌在體內(nèi)可產(chǎn)生大量內(nèi)源性乙醇來誘導(dǎo)ABS發(fā)生，表明該菌是ABS發(fā)作的重要致病菌。

圖3. ABS患者腸道不同部位的產(chǎn)乙醇能力及分離出的HiAlc克雷伯菌的特征

誘導(dǎo)HiAlc克雷伯氏菌產(chǎn)生酒精的膳食成分的鑒定

將5名ABS患者發(fā)病及恢復(fù)期和5名HC的糞便樣本在含有不同濃度碳水化合物或蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在含有不同單糖培養(yǎng)基中，ABS患者發(fā)病期的糞便菌群可產(chǎn)生高達 35 mmol/L 的乙醇，而在用含有其他底物的培養(yǎng)基培養(yǎng)的同樣菌群時，酒精濃度要低得多（<10 mmol/L）。此外，ABS 患者恢復(fù)期以及HC組糞便菌群產(chǎn)乙醇濃度較低。這些結(jié)果表明單糖可以快速誘導(dǎo)HiAlc 克雷伯菌發(fā)酵產(chǎn)生乙醇，是ABS發(fā)作的重要食物誘因。

圖4. 不同膳食成分誘導(dǎo)因素評估

靶向腸道菌群治療的臨床驗證

最后以ABS-2患者為例分析腸道菌群對不同抗生素的敏感性，其中左氧氟沙星和亞胺培南的使用顯著降低了腸道菌群的產(chǎn)酒能力，并且這兩種抗生素存在時，發(fā)酵的主要副產(chǎn)物短鏈脂肪酸（例如乙酸、丙酸、丁酸和戊酸）也顯著減少，克雷伯菌豐度顯著降低�；�于此，對ABS-2患者進行微生物群相關(guān)治療：補充15%氨基酸和維生素C注射液(250 mL/天)3天后，患者飲食被限制為無糖和無碳水化合物，在醫(yī)院口服抗生素(左氧氟沙星500 mg/天)治療1周后，患者中毒癥狀逐漸消退。隨后根據(jù)患者與健康對照者之間差異菌群，使用益生菌進行腸道菌群重建，益生菌為含有26種乳酸桿菌的商業(yè)復(fù)合益生菌和一種含有丁酸梭菌和芽孢桿菌的益生菌。期間患者BAC在0-13 mmol/L持續(xù)波動并最終降至0 mmol/L，同時，克雷伯菌的拷貝數(shù)也顯著降低。

圖5. 抗生素治療對腸道菌群的作用

小結(jié)

綜上，本研究報道了細菌性ABS的腸道菌群特征、動態(tài)變化以及治療效果。研究結(jié)果證實，一些腸道細菌通過產(chǎn)生大量內(nèi)源性酒精而過度生長導(dǎo)致ABS的發(fā)生。使用適當(dāng)?shù)目股�素加上�?fù)雜的益生菌制劑和控制飲食能夠有效治療細菌性ABS。此外，內(nèi)源性乙醇的產(chǎn)生不僅對ABS很重要，而且對NASH和許多其他疾病也很重要。本研究的方法將有助于臨床醫(yī)生對ABS進行精確診斷，并為ABS的替代治療策略的研究提供新的途徑。

圖6. 細菌性ABS的產(chǎn)生機制
 

客戶案例原文

Xue G, et al. Three Klebsiella species as potential pathobionts generating endogenous ethanol in a clinical cohort of patients with auto-brewery syndrome: a case control study. EBioMedicine. 2023.

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