ArrayJet芯片點(diǎn)樣儀在海洋藻類多糖代謝研究中的應(yīng)用
瀏覽次數(shù):684 發(fā)布日期:2023-5-15
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海洋微藻承擔(dān)著全球一半的二氧化碳固定任務(wù),與此同時(shí),他們還為擬桿菌(Bacteroidetes)等海洋微生物提供有機(jī)底物。在這個(gè)過(guò)程中,擬桿菌應(yīng)用碳水化合物活性酶 (Carbohydrate-active enzymes, CAZymes)降解藻類多糖,使之成為能夠被其吸收利用的物質(zhì)和能量來(lái)源,因此,其介導(dǎo)的藻類聚糖降解利用是海洋食物鏈有機(jī)質(zhì)循環(huán)的重要環(huán)節(jié)。在Bacteroidetes的基因組中,編碼Cazyme的基因區(qū)域稱為多糖利用區(qū) (Polysaccharide utilization loci, PULs)。目前雖然有一些研究關(guān)注PULs降解藻類多糖的過(guò)程,但是在海洋微生物中PULs的底物特異性及其降解藻類多糖的分子機(jī)制還并不清楚。
該文章于2022年11月發(fā)表在The ISME Journal雜志,作者來(lái)自于德國(guó)不來(lái)梅大學(xué)海洋環(huán)境科學(xué)研究中。多糖是參與海洋碳循環(huán)的一類含量豐富的生物大分子,不同形式的單糖通過(guò)糖苷鍵進(jìn)行連接,形成了多糖的分子多樣性。為了從多糖中獲取能量和物質(zhì),微生物使用CAZymes對(duì)多糖的糖苷鍵和化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行分解并加以利用。在此基礎(chǔ)上,根據(jù)CAZymes的序列、折疊方式以及底物特異性主要分為糖苷類水解酶(GHs)和碳水化合物酯酶(CEs)。
多糖β-甘露聚糖(β-mannan)在陸生植物中較為常見(jiàn),但在海洋微藻中還知之甚少。有研究表明擬桿菌是陸地生態(tài)系統(tǒng)的多糖降解劑,特別是在人類的腸道中降解β-mannan,但其在海洋藻類生物中的作用還有待研究。在此背景下,作者在海洋擬桿菌基因組中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)具有β-甘露聚糖多糖利用位點(diǎn)的基因:mar_2010_75。為了驗(yàn)證該基因的功能,作者采用表位缺失微陣列技術(shù)來(lái)證實(shí)這一假設(shè)。具體方法是利用英國(guó)ArrayJet點(diǎn)樣儀將不同藻類的植物多糖點(diǎn)印在硝酸纖維素膜上與并與攜帶mar_2010_75的PULs進(jìn)行反應(yīng)。結(jié)果顯示PULs編碼的GH27和GH5_26蛋白具有α-1,6-半乳糖酶和β-1,4-葡聚糖酶活性,表明其底物是半乳甘露聚糖,且β-甘露聚糖PULs受到半乳甘露聚糖的激活。因此判斷PULs可編碼具有活性的甘露聚糖酶、葡聚糖酶和半乳糖酶(圖1)。
圖1.A:從不同種類的硅藻中提取多糖,并將其點(diǎn)印到硝酸纖維素膜上,縱軸是不同種類的硅藻樣本,橫軸是GH26C,GH5_26,對(duì)照buffer,甘露聚糖酶,葡萄糖酶,半乳糖淀粉酶,進(jìn)行反應(yīng),檢測(cè)采用特異性識(shí)別β-1、4-甘露聚糖的探針LM21和特異性識(shí)別β-1、3/1、4-葡聚糖的探針BS-400-3;B:2016年自微藻開(kāi)花期間進(jìn)行采樣并將其溶解在高分子量溶解有機(jī)物(HMWDOM)中進(jìn)行多糖提取并點(diǎn)樣,采用GH26A,GH26B,對(duì)照buffer,甘露聚糖酶進(jìn)行反應(yīng),檢測(cè)采用特異性識(shí)別β-1、4-甘露聚糖的探針LM21。熱圖中的數(shù)值對(duì)應(yīng)于至少兩個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均信號(hào)強(qiáng)度(每個(gè)提取物由每個(gè)陣列中的至少兩個(gè)點(diǎn)表示)。每個(gè)數(shù)據(jù)集中的最高平均信號(hào)被設(shè)置為100,所有其他值都相應(yīng)地進(jìn)行歸一化統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果表明不同的硅藻分離物中含有β-甘露聚糖和β-葡聚糖。
結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果,作者發(fā)現(xiàn)了一種β-甘露聚糖PULs——mar_2010_75,可以被看作是海洋細(xì)菌靶向含β-甘露聚糖底物的一個(gè)模型。這種降解機(jī)制部分與腸道細(xì)菌相似,但也有顯著的差異,如編碼的GH5_26蛋白參與其中。這種不同物種間的聚糖酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)特異性的揭示了碳循環(huán)在初級(jí)生產(chǎn)者和次級(jí)消費(fèi)者之間的聯(lián)系。
原文鏈接:https://doi.org/10.1038/s41396-022-01342-4
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