連續(xù)稀釋是藥物發(fā)現(xiàn)中劑量反應(yīng)曲線的重要組成部分。連續(xù)稀釋在檢測(cè)限測(cè)試、qPCR分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線以及各種分析和儀器的校準(zhǔn)曲線中也發(fā)揮著重要作用。連續(xù)稀釋的準(zhǔn)確度是對(duì)結(jié)果有顯著影響的一個(gè)重要因素。使用電動(dòng)移液器進(jìn)行連續(xù)稀釋可提高樣品濃度的準(zhǔn)確度，并減少連續(xù)稀釋中最高稀釋度下的誤差傳播。

Download

《使用電動(dòng)移液器改善連續(xù)稀釋的準(zhǔn)確度》應(yīng)用說明通過研究證明了電動(dòng)移液器是在制備連續(xù)稀釋液中的更優(yōu)選擇。此外，電動(dòng)移液器具備改進(jìn)的人體工程學(xué)設(shè)計(jì)，能對(duì)樣品進(jìn)行電動(dòng)混合，并具有對(duì)移液方案進(jìn)行預(yù)編程的能力，這些功能為其在連續(xù)稀釋液制備中的應(yīng)用帶來了更多的優(yōu)勢(shì)。
引言

連續(xù)稀釋在藥物發(fā)現(xiàn)中扮演著重要的角色。在生物制藥行業(yè)，質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室越來越多地將用到連續(xù)稀釋的質(zhì)量控制工藝合并，其中包括使用吸光度法或熒光染料來間接推斷稀釋性能、準(zhǔn)確度和精確度。

制備連續(xù)稀釋液的主要挑戰(zhàn)是準(zhǔn)確度和時(shí)間。移液過程中誤差的傳遞會(huì)影響連續(xù)稀釋的準(zhǔn)確性。

本應(yīng)用說明的目的是測(cè)試使用電動(dòng)移液器進(jìn)行準(zhǔn)確連續(xù)稀釋的可靠性。我們使用電動(dòng)移液器和領(lǐng)先的手動(dòng)移液器制備連續(xù)稀釋液，并進(jìn)行對(duì)比。

在本應(yīng)用說明中，我們對(duì)連續(xù)稀釋液進(jìn)行了以下測(cè)試：

●移液器類型
●稀釋液濃度的準(zhǔn)確度
●稀釋液濃度的精確度（重現(xiàn)性）

方法

移液器和移液器吸頭
使用賽多利斯Picus® 電動(dòng)移液器、賽多利斯Safetyspace低吸附吸頭和優(yōu)質(zhì)的手動(dòng)移液器制備連續(xù)稀釋液。

連續(xù)稀釋
對(duì)稀釋DNA進(jìn)行直接吸光度檢測(cè)，用于對(duì)連續(xù)稀釋的準(zhǔn)確度進(jìn)行定量。采用無核酸酶水制備沙門氏菌DNA。使用手動(dòng)或電動(dòng)移液器制備了沙門氏菌DNA的七點(diǎn)二倍連續(xù)稀釋液。

數(shù)據(jù)分析
分析數(shù)據(jù)的線性度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性。通過將濃度測(cè)量值與相應(yīng)稀釋因子的倒數(shù)作圖并確定R2值，來確定稀釋系列的線性度。稀釋系列的準(zhǔn)確度（濃度測(cè)量值與預(yù)期濃度的接近程度）由百分比誤差（不準(zhǔn)確度%）表示。將濃度測(cè)量值減去預(yù)期濃度，再除以濃度測(cè)量值，然后轉(zhuǎn)換為百分比，即可得到準(zhǔn)確度（不準(zhǔn)確度%）。稀釋系列的精確度（重現(xiàn)性）用變異系數(shù)（CV%）表示，計(jì)算方法為用三次重復(fù)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)偏差除以平均濃度，然后轉(zhuǎn)換為百分比。

結(jié)果
使用電動(dòng)移液器或手動(dòng)移液器制備的連續(xù)稀釋液生成的線性圖表明，兩種手持式移液器制備的稀釋系列都具有線性，兩者的R2值均為0.9999（圖1）。
  圖1：連續(xù)稀釋液的線性。（A）Picus® 電動(dòng)移液器（B）優(yōu)質(zhì)手動(dòng)移液器

準(zhǔn)確度
為了評(píng)估稀釋系列的準(zhǔn)確度，將每個(gè)稀釋步驟的測(cè)量濃度與預(yù)期濃度進(jìn)行對(duì)比。用電動(dòng)移液器操作的預(yù)期濃度和實(shí)際濃度之間的差異始終小于 5 %。對(duì)于稀釋系列中的最高稀釋度，與使用手動(dòng)移液器獲得的結(jié)果相比，使用電動(dòng)移液器提高了最高稀釋度樣品的準(zhǔn)確度（圖2）。 圖2.優(yōu)質(zhì)手動(dòng)移液器與電動(dòng)移液器的連續(xù)稀釋準(zhǔn)確度對(duì)比

重現(xiàn)性
重現(xiàn)性（或移液精確性）對(duì)連續(xù)稀釋來說非常重要。對(duì)于使用Picus® 電動(dòng)移液器制備的三次連續(xù)稀釋液，其連續(xù)稀釋濃度的百分比變異系數(shù)（CV%）很低，遠(yuǎn)低于 5 %（表1）。