應(yīng)用案例:對(duì)牙膏中的耐熱大腸菌群進(jìn)行檢驗(yàn)
瀏覽次數(shù):531 發(fā)布日期:2024-10-11
來源:程淇生物
方案摘要:耐熱大腸菌群系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌,在44.5℃培養(yǎng)24 h~48 h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸并產(chǎn)氣。該菌主要來自人和溫血?jiǎng)游锛S便,可作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)牙膏的衛(wèi)生質(zhì)量, 推斷牙膏中有否污染腸道致病菌的可能。本方法利用fluidot移液類產(chǎn)品達(dá)到快速檢測(cè)出牙膏中耐熱大腸菌群含量。
方案詳情:
使用特定的培養(yǎng)基和試劑用于支持耐熱大腸菌群的生長(zhǎng),通過培養(yǎng)基的培養(yǎng)和適當(dāng)?shù)臏囟葪l件下(通常是35-37℃)的孵育,觀察是否有耐熱大腸菌群生長(zhǎng)。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、 儀器
① 恒溫水浴箱或隔水式恒溫箱:44.5℃±0.5℃。
② 溫度計(jì)。
③ 顯微鏡。
④ 載玻片。
⑤ 接種環(huán)fluidot FDT-D80001
⑥ 電磁爐。
⑦ 三角瓶:250 mL。
⑧ 試管:18 mm×150 mm。
⑨ 小倒管。
⑩ pH計(jì)或pH試紙。
⑪ 高壓滅菌器。
⑫ 無菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)FDT-SP01001
⑬無菌吸管:10 mL(具0.1 mL刻度)FDT-SP01010
⑭手動(dòng)移液器:fluidot 1 mL MSP1K與 10 mL MSP10K
⑮電動(dòng)移液器:pipetty 1 mL MSIC01-02-1000
⑯吸頭:1.5mL FDT-1500-1-TSF
⑰滅菌平皿:fluidot FDT-9CM-2-S,直徑90 mm。
⑱蠕動(dòng)泵分液器:fluidot 600D
2、培養(yǎng)基和試劑
① SCDLP液體培養(yǎng)基
② 雙倍乳糖膽鹽(含中和劑)培養(yǎng)基
③ 伊紅美藍(lán)(EMB)瓊脂
④ 蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用)
⑤ 靛基質(zhì)試劑
⑥ 革蘭氏染色液:
三、實(shí)驗(yàn)步驟
① 取10 mL 1:10的檢液,加到10 mL雙倍乳糖膽鹽(含中和劑)培養(yǎng)基中,置44.5℃±0.5℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h±2 h,如既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣,繼續(xù)培養(yǎng)至48 h±2 h,如仍既不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣,則報(bào)告為耐熱大腸菌群陰性。
② 如產(chǎn)酸產(chǎn)氣,劃線接種到伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,置36℃±1℃培養(yǎng)18 h~24 h。同時(shí)取該培養(yǎng)液1~2滴接種到蛋白胨水中,置44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24 h±2 h。 經(jīng)培養(yǎng)后,在上述平板上觀察有無典型菌落生長(zhǎng)。耐熱大腸菌群在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的典型菌落呈深紫黑色,圓形,邊緣整齊,表面光滑濕潤(rùn),常具有金屬光澤。也有的呈紫黑色,不帶或略帶金屬光澤;或粉紫色、中心較深的菌落,亦常為耐熱大腸菌群,應(yīng)注意挑選。
③ 挑取上述可疑菌落,涂片作革蘭氏染色鏡檢。
④ 在蛋白胨水培養(yǎng)液中,加入靛基質(zhì)試劑約0.5 mL,觀察靛基質(zhì)反應(yīng)。陽性反應(yīng)液面呈玫瑰紅色;陰性反應(yīng)液面呈試劑本色。
⑤ 如選擇生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統(tǒng),可從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取經(jīng)純化的可疑菌落,用無菌稀釋液制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙,使用生化鑒定試劑盒或微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。
四、檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告
經(jīng)上述檢驗(yàn)步驟,若發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,平板上有典型菌落,并經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性無芽胞短桿菌,靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性,則可報(bào)告被檢樣品中檢出耐熱大腸菌群。