第一章

抗體藥腥風(fēng)血雨

正如我們今天要聊的抗體藥研發(fā)，由大分子藥物，小分子及多肽類藥物，甚至是相關(guān)佐劑都可能直接或者間接引起比較大的免疫原性反應(yīng)，輕者可能項(xiàng)目止步于臨床前期甚至臨床期，對(duì)經(jīng)濟(jì)投入可謂壓力山大；重者則可能會(huì)降低藥物療效，引起過敏反應(yīng)，甚至威脅生命安全。故ADA（Anti-Drug-Antibody）——在PK研究的有效檢測(cè)，即系統(tǒng)性、科學(xué)性地完成ADA檢測(cè)是PK研究的迫切問題。

 

近年來經(jīng)常會(huì)有各種抗體藥研發(fā)的新聞見諸報(bào)端，該市場(chǎng)可謂如火如荼，正值高光時(shí)期，從各大單抗藥企的社會(huì)責(zé)任來看，正不遺余力解決民生問題，甚感欣慰。

 

第二章  

ADA檢測(cè)、免疫原性指導(dǎo)，你需要知道這些

那我們遵循規(guī)則，來探討一下ADA檢測(cè)的特點(diǎn)，繼2009版免疫原性指導(dǎo)原則之后，2016版FDA《免疫原性指導(dǎo)原則（試行）》的發(fā)布給免疫原性分析指明了方向，把兩個(gè)相隔7年的制度原則進(jìn)行比較，即可得到以下幾點(diǎn)特征：

· 2016版指導(dǎo)原則推薦使用基于風(fēng)險(xiǎn)的方法來評(píng)價(jià)免疫反應(yīng)及其帶來的副作用；

· 篩選和確證試驗(yàn)的方法靈敏度至少達(dá)到100ng/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于之前要求的250-500ng/mL；

· 對(duì)確證和滴度試驗(yàn)做了詳細(xì)說明；

· 對(duì)方法學(xué)建立和驗(yàn)證的時(shí)間做了更加詳細(xì)的說明；

· 增加了關(guān)于糖基化、Fc融合、ADC等內(nèi)容的討論；

· 對(duì)于生物類似藥，要用一套標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)來真實(shí)對(duì)比類似藥和原研藥的ADA水平。

 

綜合幾點(diǎn)，即FDA對(duì)免疫原性的評(píng)估指導(dǎo)給出了具體要求：

· 高靈敏度

· 高特異性

· 高穩(wěn)定性

· 高親和力

 

第三章

FDA的高要求，我們?nèi)绾螒?yīng)對(duì)？

結(jié)合以上幾點(diǎn)特征，我們來看看目前通用的檢測(cè)方法：

對(duì)于抗體研究發(fā)展趨勢(shì)，鼠源向人源化—全人抗體—多功能化（雙/多特異性抗體）--小型化（抗體片段/肽段）--精準(zhǔn)化（抗體/藥物偶聯(lián)物-ADC），對(duì)分析技術(shù)的要求越來越高。

 

常規(guī)分析技術(shù)一般包括直接或橋接酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）、電化學(xué)發(fā)光法（ECLA）、放射免疫沉淀分析（RIPA）、表面等離子體共振（SPR）等，可采取一種或幾種組合。但由于受限于目前的技術(shù)瓶頸（如ELISA-酶聯(lián)免疫法,ECLA-電化學(xué)發(fā)光法）檢測(cè)靈敏度，即檢測(cè)背景的受限和反應(yīng)性檢出能力的受限，再結(jié)合ADA的階段性特點(diǎn)，不同時(shí)間段的抗體亞型存在差異性的；而且機(jī)體在給藥后藥物以及內(nèi)源性分子濃度水平的“干擾”均會(huì)影響分析結(jié)果，故抗藥性抗體分析方法應(yīng)準(zhǔn)確、靈敏、特異、耐用，能檢測(cè)出包括IgG和IgM等所有亞型，同時(shí)基于風(fēng)險(xiǎn)采用多層次檢測(cè)策略評(píng)價(jià)ADA，按照篩選分析、確證分析、中和分析等進(jìn)行逐層分析。

 

第四章

秘籍出世——

默克幫您應(yīng)對(duì)ADA檢測(cè)的挑戰(zhàn)

目前默克生命科學(xué)依托其SMC單分子超高靈敏度檢測(cè)平臺(tái)，專門開發(fā)了ADA檢測(cè)的專用方法學(xué)開發(fā)用檢測(cè)試劑盒。

圖1：SMC^TM免疫原性檢測(cè)及開發(fā)試劑盒（Cat.No.03-0175-00）

圖2：?jiǎn)畏肿佑?jì)數(shù)，精確計(jì)數(shù)光子數(shù)量

圖示3：Biotin-drug/AF-drug等摩爾滴定抗兔多抗呈陽(yáng)性反饋，曲線設(shè)置12個(gè)點(diǎn)，CV<20%

圖示4：Biotin-drug/AF-drug等摩爾滴定N/S Ratio，紅色框中ADA在23.44ng/mL濃度下的表現(xiàn)出較好的信噪比和動(dòng)

圖5：為基質(zhì)耐受檢測(cè)，A為運(yùn)行基質(zhì)濃度為20%，10%，5%，0%的響應(yīng)值，B為信噪比反饋

圖6：對(duì)于標(biāo)曲反饋，20%Matrix（1：5） Biotin-drug0.025µg/mL和AF-drug 0.025µg/mL為最佳的確認(rèn)結(jié)果

圖7：相較傳統(tǒng)ECL法，SMC檢測(cè)靈敏度提高了十倍（從195ng/mL提升到20ng/mL）

*數(shù)據(jù)源于50只藥物誘導(dǎo)獼猴樣本

圖8：數(shù)據(jù)表明沒有證據(jù)證明hook效應(yīng)會(huì)影響濃度低于100，000ng/mL的低敏感性范圍

圖9：藥物耐受性檢測(cè)：結(jié)果顯示該實(shí)驗(yàn)降低了循環(huán)治療的耐受性，可檢出在0.125µg/mLMAb中約97.7ng/mL的ADA濃度

 

終章

結(jié)果的精確與否，就在你一念之間
 

SMC的優(yōu)勢(shì)到底在哪里？

 

看看你的結(jié)果，如果和FDA的要求相差甚遠(yuǎn)，SMC或許可以幫你找到答案。

 

SMC技術(shù)相較于當(dāng)前的ADA檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)提升了至少10倍的檢測(cè)靈敏度。

 

相較當(dāng)前的方法可降低基質(zhì)耐受并保持一致的藥物耐受性。

 

極大的降低試劑的消耗成本并可保持穩(wěn)定的檢測(cè)動(dòng)力學(xué)范圍。

 

當(dāng)前的數(shù)據(jù)并未做過多的優(yōu)化，用戶仍可通過試劑盒中標(biāo)配的優(yōu)化buffer進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化以實(shí)現(xiàn)更好的性能反饋。

 

SMC提升ADA檢測(cè)靈敏度有助于在免抗疫親和力成熟和ADA類型轉(zhuǎn)換之前檢出ADA濃度。