致病相關(guān)(PR)蛋白參與植物防御,其具有多種功能適應(yīng)性,有助于抵抗各種病原體、提高環(huán)境脅迫耐受性。沙柳是一種生長迅速的柳樹品種,可以耐受許多不利環(huán)境。
中國林科院亞熱帶林業(yè)研究所卓仁英研究員課題組在Environmental and Experimental Botany上發(fā)表了一篇文章,題目為“Pathogenesis-related protein PR10 from Salix matsudana Koidz exhibits resistance to salt stress in transgenic Arabidopsis thaliana”,主要探究PR蛋白在植物耐鹽機制中起到的作用。
前期的比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析表明:沙柳PR蛋白(SmPR10)較為豐富,經(jīng)過100 mM NaCl處理后表達上調(diào)。本實驗以沙柳為材料,克隆并鑒定了SmPR10基因,以驗證其在耐鹽性中的作用。SmPR10的氨基酸序列與紫蘇柳和毛白楊的PR蛋白的序列同源性分別為98%和93%。SmPR10定位在擬南芥原生質(zhì)體的胞質(zhì)中,根的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平較高,且100mM NaCl處理后表達上調(diào)。免疫定位分析發(fā)現(xiàn),韌皮部纖維細胞和根木質(zhì)部中特異性的檢測到SmPR10。而且,SmPR10的異質(zhì)過表達提高了轉(zhuǎn)基因擬南芥的耐鹽性,具體表現(xiàn)在根長度、根數(shù)量、Na+流速、以及葉綠素含量、MDA含量、電導(dǎo)率等生理參數(shù)及SOD和POD酶活性水平。
擬南芥根部Na+流檢測圖
對照組、鹽脅迫組擬南芥根部Na+流結(jié)果。正值表示外排
其中,Na+流速利用基于非損傷微測技術(shù)(Non-invasive Micro-test Technology, NMT)的NMT活體生理檢測儀 Physiolyzer®進行檢測,發(fā)現(xiàn)正常條件下,轉(zhuǎn)基因組與野生對照組的Na+外排相似。但是,100mM NaCl處理后,轉(zhuǎn)基因組的Na+外排明顯增加。這說明:相比于野生型,SmPR10過表達幼苗根部的Na+外排能力更高,從而更加耐鹽。
1、工業(yè)原料昆蟲相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)的基礎(chǔ)研究
紫膠、白蠟、五倍子研究是資源昆蟲所的優(yōu)勢。在提升五倍子質(zhì)量、產(chǎn)量研究過程中,五倍子同母體間營養(yǎng)物質(zhì)、信號的交換運輸,可以通過非損傷對母體-蟲癭連接部進行檢測。類似的研究,在愈傷組織上已經(jīng)開展。
此外,蠶絲形成的主要器官絲腺,也有研究者已經(jīng)利用非損傷開展離子轉(zhuǎn)運相關(guān)研究。
2、森林病蟲害研究
1)蟲害
“離子流信號是植物感受外界刺激的原初信號”。北京林業(yè)大學(xué)沈應(yīng)柏教授在接受中關(guān)村非損傷微測技術(shù)產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟(簡稱“NMT聯(lián)盟”)采訪時表示,在植物抗蟲防御研究中,植物為什么能夠識別出昆蟲取食?這與離子流信號的傳遞密切相關(guān)。
在應(yīng)對外界刺激時,植物也會做出多種調(diào)整,其中很重要的一點就是調(diào)節(jié)氣孔的開閉。沈應(yīng)柏教授利用非損傷,對氣孔調(diào)節(jié)機制進行了深入研究,并在Plant Journal(2015, 83(4): 638-649.)上發(fā)表了研究成果。
2)病害
Ca2+振蕩是病原菌與植物形成穩(wěn)定互作的標(biāo)志。
病原菌侵染后葉肉組織的Ca2+流振蕩現(xiàn)象
J Membrane Biol, 1998, 161(1): 45-54.
90年代末,研究者們就開始利用NMT研究植物病原體侵染過程的微觀信號傳遞。目前的研究成果顯示,病原體侵染植物的過程,與Ca2+、K+、Cl-等諸多離子流信號相關(guān)。
Plos Pathog:農(nóng)科院寧約瑟中農(nóng)王毅|NMT驗證稻瘟病菌利用K通道抑制先天免疫
植物病原防御第一步:Ca2+相關(guān)質(zhì)膜陰離子通道打開
Ca2+外流作為細胞防御過程中的標(biāo)志性反應(yīng)
3、森林培育之良種生產(chǎn)
耐鹽堿、耐瘠薄、生長周期短、產(chǎn)量高。非損傷在林木育種領(lǐng)域的應(yīng)用,相比于其它領(lǐng)域尤為突出。北京林業(yè)大學(xué)陳少良教授是國內(nèi)最先應(yīng)用NMT進行林木抗逆研究的研究者,其2009年發(fā)表的通篇使用NMT離子流數(shù)據(jù)的文章(Plant Physiol, 2009, 149: 1141-1153.),引用次數(shù)已達177次。目前,Na+、K+、H+流,已成為陳少良教授實驗室研究的基石。
其后,來自林科院蘇曉華研究員、西北農(nóng)林科技大學(xué)(現(xiàn)中國林科院)的羅志斌教授、東北林業(yè)大學(xué)(現(xiàn)浙江農(nóng)林大學(xué))柳參奎教授、林科院亞林所卓仁英研究院,在林木鹽堿脅迫、氮營養(yǎng)、重金屬脅迫等領(lǐng)域,發(fā)表了諸多研究成果。
Front Plant Sci:林科院亞林所卓仁英NMT驗證Cu/Zn SOD促進植物富集鎘
J Exp Bot:西北農(nóng)林羅志斌組楊樹適應(yīng)氮受限環(huán)境的代謝機制
Plant Biotechnol J:PutVHA-c促根系排Na提升植物耐鹽能力