一、性能參數(shù)

 

產(chǎn)品名稱：Transfection Reagent 簡(jiǎn)稱“TR”     產(chǎn)品貨號(hào)： FH880806

濃度：1μg/μl                          推薦使用濃度：1μg-10μg/ml

規(guī)格：50μl （贈(zèng)送）                    保存條件：2-8℃ ，切勿放-20℃

有效期至： 18個(gè)月                       運(yùn)輸條件：常溫運(yùn)輸

使用范圍：僅限科研使用，不能應(yīng)用于臨床。

 

二、產(chǎn)品詳細(xì)描述

1、產(chǎn)品說(shuō)明

TR（質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑）是一種多聚陽(yáng)離子聚合物，具有較高的陽(yáng)離子電荷密度使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何 pH 下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。這種聚陽(yáng)離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺，經(jīng)進(jìn)一步的改性后，其轉(zhuǎn)染性能好于樹(shù)枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。

 

 2、主要特點(diǎn)

·  高效轉(zhuǎn)染各種貼壁細(xì)胞。

·  對(duì)懸浮細(xì)胞有很高的轉(zhuǎn)染效率。

·  在同類產(chǎn)品中具有較高的轉(zhuǎn)染效率和較低的毒性。

·  有無(wú)血清存在(0-20％)對(duì)轉(zhuǎn)染試劑的效果無(wú)影響。

·  可用于單個(gè)質(zhì)�；蚨鄠�(gè)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)。

·  轉(zhuǎn)染24-72小時(shí)后，有高的蛋白表達(dá)量。

 

     3、注意事項(xiàng)

 推薦在混合前使用Opti-MEM （Cat. No. 267485)或DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基(Cat. No. SH30022.01B)稀釋TR和核酸。

· 轉(zhuǎn)染過(guò)程中勿向培養(yǎng)基中添加抗生素，以免造成細(xì)胞死亡。

· 不同批次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)保持細(xì)胞接種條件相同。

·  轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的狀態(tài)好壞對(duì)最終的轉(zhuǎn)染效果高低影響很大，請(qǐng)務(wù)必保證轉(zhuǎn)染前，細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。

 

三、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染步驟

所列步驟適用于24孔板培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其他培養(yǎng)材料，請(qǐng)參考表1按照轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計(jì)算。大部分細(xì)胞系所使用的DNA(μg)與TR(μg)的比值為1:3或1:4，轉(zhuǎn)染狀態(tài)良好的細(xì)胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達(dá)水平和低細(xì)胞毒性。

1、貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×10⁵個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中，在轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞可長(zhǎng)至90-95%融合。 

   懸浮細(xì)胞：在配制轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×10⁵個(gè)細(xì)胞接種于500μl培養(yǎng)基中。

2、轉(zhuǎn)染液制備，每孔細(xì)胞用量如下： 

A. 用50μlDMEM培養(yǎng)基（或者其他無(wú)血清培養(yǎng)基）稀釋質(zhì)粒DNA，輕輕混勻。

B. 取適量TR在50μl DMEM培養(yǎng)基中稀釋，室溫孵育5min。

C. 將前兩步所稀釋的DNA和TR 混合，輕輕混勻，室溫放置30min。

3、在每孔細(xì)胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液，輕輕搖勻。

4、貼壁細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后可更換培養(yǎng)基，懸浮細(xì)胞可在轉(zhuǎn)染后的18-48h之間，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。轉(zhuǎn)染18-48h之后可檢測(cè)基因表達(dá)。如果檢測(cè)到蛋白表達(dá)，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染后24-72h收集培養(yǎng)液。

5、對(duì)于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng)，第二天可加入選擇培養(yǎng)基。

 

表1  各種細(xì)胞培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染推薦用量

培養(yǎng)皿/板	表面積(cm2)	種板密度	培養(yǎng)液	混合液	質(zhì)粒	TR
10cm	60	2-3×106cell/dish	10 ml	2×500μl	10μg	30-40 μl
60mm	20	8-10×105cell/dish	3 ml	2×150μl	3μg	9-12 μl
6孔	10	2-3×105cell/well	2 ml	2×100μl	2.5μg	7.5-10 μl
12孔	4	1-3×105cell/well	1 ml	2×50μl	1μg	3-4 μl
24孔	2	0.5-2×105cell/well	0.5 ml	2×25μl	0.5μg	1.5-2 μl
96孔	0.3	1000-100000cell/well	0.1 ml	2×5μl	0.1μg	0.3-0.4 μl

下圖為我司TR試劑與其他轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞中的對(duì)比圖

 

左圖為我司TR轉(zhuǎn)染試劑與市面常用的知名品牌轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞時(shí)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，我司TR的轉(zhuǎn)染效率要明顯超過(guò)品牌試劑轉(zhuǎn)染效率；

右圖為我司TR轉(zhuǎn)染試劑與市面常用的知名品牌轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞時(shí)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，我司TR的轉(zhuǎn)染效率要明顯超過(guò)品牌試劑的轉(zhuǎn)染效率。