DAPI 簡易細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒產(chǎn)品說明書
DAPI 簡易細(xì)胞核形態(tài)染色試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
DAPI 簡易細(xì)胞核形態(tài)染色試劑是一種旨在通過使用熒光染料 DAPI 與細(xì)胞核 DNA 特異性結(jié)合，并發(fā)出熒光檢測信號，用于分析和觀察細(xì)胞核形態(tài)或 DNA 含量以及雙重染色或重疊染色定位的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞核（動物、人體、植物、昆蟲等）的觀察。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，熒光清晰。
技術(shù)背景
作為細(xì)胞 DNA 染色劑之一的 4，6－二咪基－4-聯(lián)苯基吲哚（4，6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特異性地與 DNA 雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用，從而與 DNA 的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團(tuán)的吸收峰是 358nm 而散射峰是 461nm，正好是 UV（紫外光）的激發(fā)波長 356nm，使得 DAPI 成為一種常用的熒光檢測信號，并作為雙重染色或重疊染色的主要染色劑之一。
產(chǎn)品內(nèi)容
|
染色液（Reagent A） |
毫升 |
|
產(chǎn)品說明書 |
1 份 |
|
保存方式 |
|
|
保存 在－20℃冰箱里，避免光照；有效保證 6 月 |
|
|
用戶自備 |
|
|
磷酸緩沖液（YJ12033.1）：用于清洗樣品 |
|
|
微型臺式離心機(jī)：用于懸浮細(xì)胞的操作 |
|
|
蓋玻片：用于染色后封片 |
|
|
熒光顯微鏡：用于觀察細(xì)胞核 DNA 染色 |
|
|
實(shí)驗(yàn)步驟 |
|
一、 貼壁細(xì)胞染色
1． 準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞培養(yǎng) 48 孔板的待測細(xì)胞，每孔鋪滿率達(dá) 70％
（注意：可以使用載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm 培養(yǎng)皿，和其它培養(yǎng)孔板，見注意事項(xiàng) 6）
2． 進(jìn)行染色前清理、固著、通透等步驟
3． 小心抽掉預(yù)處理液體，空氣中晾干
（注意：由此步驟開始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）
4． 小心加入 xx 微升 染色液（Reagent A），覆蓋培養(yǎng)孔表面
1
5． 室溫下孵育 10 分鐘，避免光照
6． 小心抽掉 染色液（Reagent A）
7． 小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋培養(yǎng)孔表面
8． 即刻在倒置熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長 350nm，散發(fā)波長 460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）
二、 懸浮細(xì)胞染色
1． 將懸浮細(xì)胞（1 X 106細(xì)胞）移入到 1.5 毫升離心管
2． 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
3． 小心抽掉上清液
4． 進(jìn)行染色前清理、固著、通透等步驟
5． 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
6． 小心抽掉預(yù)處理液體
（注意：由此步驟開始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）
7． 小心加入 xx 微升 染色液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
8． 室溫下孵育 10 分鐘，避免光照
9． 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
10．小心抽掉 xx 微升 染色液（Reagent A）
11．小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
12．放進(jìn)微型臺式離心機(jī)離心 10 分鐘，速度為 300g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）
13．小心抽掉上清液
14．小心加入 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），混勻細(xì)胞顆粒群
15．移出 xx 微升到載玻片上，放上蓋玻片
16．即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長 350nm，散發(fā)波長 460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）
三、 載玻片染色
1． 準(zhǔn)備 1 個細(xì)胞載玻片
2． 進(jìn)行染色前清理、固著、通透等步驟
（注意：由此步驟開始，用戶可以進(jìn)行抗體熒光染色或其它熒光染色）
3． 小心加上 xx 微升 染色液（Reagent A），覆蓋載玻片表面
4． 室溫下孵育 10 分鐘，避免光照
5． 小心抽掉 xx 微升 染色液（Reagent A）
6． 小心加上 xx 微升用戶自備的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），覆蓋載玻片表面
7． 小心抽掉清理液
8． 蓋上蓋玻片
9． 即刻在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察：激發(fā)波長 350nm，散發(fā)波長 460nm（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為 100 次操作
2． 本產(chǎn)品友好使用于雙重染色或重疊染色
3． 染色液（Reagent A）為半通透性染料
4． 操作時須戴手套
2
5． 操作時，避免污染母液
6． 本產(chǎn)品適合各種規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞：載玻片，載玻片培養(yǎng)皿，35mm 培養(yǎng)皿，和各種培養(yǎng)孔板，須相應(yīng)調(diào)整試劑溶液：
|
操作容器 |
試劑溶液規(guī)格 |
|
|
|
|
載玻片 |
100 微升 |
|
|
|
|
載玻片培養(yǎng)皿 |
100 微升 |
|
|
|
|
35mm 培養(yǎng)皿 |
500 微升 |
|
|
|
|
96 孔培養(yǎng)板 |
50 微升 |
|
|
|
|
48 孔培養(yǎng)板 |
100 微升 |
|
|
|
|
24 孔培養(yǎng)板 |
200 微升 |
|
|
|
|
12 孔培養(yǎng)板 |
400 微升 |
|
|
|
|
6 孔培養(yǎng)板 |
500 微升 |
|
|
|
|
25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
1 毫升 |
7． 本產(chǎn)品可用于懸浮細(xì)胞或細(xì)胞脫離處理后染色
8． 本公司提供系列簡易細(xì)胞核染色分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
