冰凍切片神經(jīng)元高爾基法染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI冰凍切片神經(jīng)元高爾基法染色試劑是一種旨在使用親銀還原技術(shù)，分析固定處理的冰凍組織切片中神經(jīng)元（neuron）、錐體細(xì)胞（pyramidal cell）、膠質(zhì)細(xì)胞（glia cell）、少突觸膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其樹突（dendrites）形態(tài)學(xué)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于冰凍腦組織或外周神經(jīng)組織切片的相關(guān)神經(jīng)細(xì)胞檢測。廣泛用于動物腦神經(jīng)病理生理解剖學(xué)的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

意大利科學(xué)家高爾基（Camillo Golgi）于1873年發(fā)明了神經(jīng)細(xì)胞黑色反應(yīng)的浸銀染色技術(shù)，從而開辟了神經(jīng)系統(tǒng)形態(tài)結(jié)構(gòu)、演變、單系發(fā)生、構(gòu)建以及疾病等學(xué)科研究，并建立了神經(jīng)學(xué)說。腦神經(jīng)組織經(jīng)固定，親銀染色后，呈現(xiàn)部分神經(jīng)細(xì)胞完全染色，而其它神經(jīng)細(xì)胞沒有任何著色的高度選擇性染色。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI固著液（Reagent A）  毫升

YIJI氧化液（Reagent B）  毫升

YIJI營養(yǎng)液（Reagent C）  毫升

YIJI強(qiáng)化液（Reagent D）  毫升

YIJI脫水液（Reagent E）  毫升

YIJI清理液（Reagent F）  毫升

YIJI染色液（Reagent G）  毫升

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

無菌手術(shù)刀和鑷子：用于解剖動物腦組織

小型玻璃染色缸或60毫米玻璃培養(yǎng)皿：用于組織切片處理的容器

火棉膠（collodion）：用于保護(hù)固著處理后的組織樣品

切片機(jī)：用于組織切片

明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片

中性樹脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

• 樣本固著處理

• 常規(guī)麻醉動物和手術(shù)（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）
• 使用適量的YIJI固著液（Reagent A）灌注處理
• 即刻小心取出腦組織
• 小心放進(jìn)到xx毫升YIJI固著液（Reagent A）里
• 室溫下浸泡孵育1小時
• 用無菌手術(shù)刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊
• 即刻用無菌鑷子夾起組織塊 
• 小心轉(zhuǎn)移到xx毫升YIJI氧化液（Reagent B）里（20毫升/2塊組織塊）
• 室溫下浸泡孵育2周，避免光照
• 小心轉(zhuǎn)移到xx毫升YIJI營養(yǎng)液（Reagent C）里
• 室溫下浸泡孵育48小時，避免光照
• 小心轉(zhuǎn)移到xx毫升YIJI強(qiáng)化液（Reagent D）里
• 室溫下浸泡孵育48小時，避免光照（注意：可以孵育1周）
• 用綿紙吸干組織快
• 使用30％蔗糖處理、OCT包埋或使用用戶自備的火棉膠（8％collodion）包埋
• 放進(jìn)－20℃冰箱里
• 取出組織塊，在－20℃條件下進(jìn)行緩慢冰凍切片，為20至100微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上
• 置于－20℃冰箱里保存

• 樣本染色處理

• 取出待測的20至100微米厚的冰凍組織切片 
• 小心加上xx微升YIJI脫水液（Reagent E）在切片上，鋪滿整個樣品表面
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI脫水液（Reagent E）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟2至4一次
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育48小時，直至呈現(xiàn)黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察；避免干化）
• 小心移去切片上的YIJI染色液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent F）中孵育2分鐘
• 小心移去切片上的YIJI清理液（Reagent F）
• （選擇步驟）進(jìn)行復(fù)染操作（建議使用YIJI甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復(fù)染試劑盒－YIJI80052）
• 透明處理
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：神經(jīng)元、錐體細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、少突觸膠質(zhì)細(xì)胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現(xiàn)黑色（如果復(fù)染――細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，胞漿尼氏（體）物質(zhì)呈現(xiàn)粉紅至紫色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
• 切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經(jīng)細(xì)胞
• 有的組織采用冰凍切片易破碎，建議第一調(diào)整切片溫度；第二切片厚度在150微米以上；如果無法解決，建議使用石蠟切片等
• 建議使用玻璃染色缸
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態(tài)下進(jìn)行
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細(xì)胞神經(jīng)系統(tǒng)成分染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰