AAV的“誕生”，有它們就夠了！

在日常生活中，我們經(jīng)常聽到或者親身參與到各種“圈”中，例如，時(shí)尚圈，娛樂圈，藝術(shù)圈，還有上海的各大商圈和可食用的甜甜圈，當(dāng)然，對(duì)大多數(shù)人來說最熟悉的莫過于微信朋友圈了。話說，在基因治療領(lǐng)域也有一個(gè)圈，小編暫且給它取名叫“病毒載體圈“，此圈中有這樣一位傲嬌的明星大咖，它不僅理化性質(zhì)獨(dú)特（可耐受凍融、65℃高溫及多種有機(jī)溶劑），而且身懷絕技，同時(shí)有著極強(qiáng)的可塑性（分12種血清型和100多種突變體），深受廣大科研和醫(yī)學(xué)工作者的青睞。在如今的生命科學(xué)領(lǐng)域，追求它似已蔚然成風(fēng)，那這位“病毒載體圈”的神奇新秀到底是誰(shuí)呢？

它，就是腺相關(guān)病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）。

AAV最初是在純化的腺病毒液中發(fā)現(xiàn)的一種污染成分，故而得名。其復(fù)制增殖需要腺病毒或者皰疹病毒等輔助病毒的協(xié)助，所以AAV是一種復(fù)制缺陷型的病毒，歸屬于細(xì)小病毒科依賴病毒屬。AAV是無(wú)包膜的單鏈線狀 DNA 病毒，其基因組約4.7kb，兩末端為反向末端重復(fù)序列（inverted terminal repeat sequence, ITR），ITR 序列之間為病毒蛋白編碼區(qū)，包含兩個(gè)開放閱讀框架，產(chǎn)生復(fù)制蛋白R(shí)ep、衣殼蛋白Cap和包裝激活蛋白AAP。

圖1 AAV基因組的結(jié)構(gòu)

AAV作為最早通過歐盟FDA認(rèn)證的基因治療載體，因其具有宿主范圍廣、非致病性、低免疫原性、長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)外源基因、良好的擴(kuò)散性能和物理性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛地應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床試驗(yàn)中。而且，越來越多的臨床試驗(yàn)證明了AAV載體的有效性和良好的安全性，使之成為基因治療研究的熱點(diǎn)，并被認(rèn)為是介導(dǎo)基因治療的理想載體之一。那么，如此受歡迎而又自帶明星光環(huán)的AAV究竟從何而來？本期，小編就為大家?guī)�來AAV“誕生”的那些事。

在病毒型基因傳遞系統(tǒng)中，有一個(gè)很大的顧慮就是輔助質(zhì)粒和載體質(zhì)粒發(fā)生重組而恢復(fù)出野生型病毒。目前大多數(shù)生成重組腺相關(guān)病毒（rAAV）的實(shí)驗(yàn)方案均需要共轉(zhuǎn)染一個(gè)載體質(zhì)粒和一個(gè)表達(dá)病毒復(fù)制和結(jié)構(gòu)基因的包裝質(zhì)粒到腺病毒(Ad)感染的培養(yǎng)細(xì)胞中。這無(wú)疑增加了野生型AAV產(chǎn)生的可能性。

吉?jiǎng)P的AAV生產(chǎn)只要有質(zhì)粒和細(xì)胞就夠了！我們的“AAV Helper-Free System“由病毒載體、pAAV-RC載體和pHelper載體三種質(zhì)粒組成。其中，pAAV-RC載體質(zhì)粒包含了AAV編碼復(fù)制蛋白和病毒衣殼蛋白的rep和cap基因；pHelper載體質(zhì)粒提供了生產(chǎn)具感染性的AAV病毒顆粒所需的腺病毒基因產(chǎn)物（例如： E2A,E4和VA RNA 基因）；其余的腺病毒基因產(chǎn)物則由穩(wěn)定表達(dá)腺病毒E1基因的宿主細(xì)胞提供。該包裝系統(tǒng)的最大優(yōu)點(diǎn)就是不用加輔助病毒，一方面，排除了輔助病毒對(duì)rAAV的污染；另一方面，減少了野生型AAV產(chǎn)生的可能，進(jìn)一步提高了AAV產(chǎn)品的安全性。

圖2 AAV的生產(chǎn)示意圖（原創(chuàng)）

吉?jiǎng)P生產(chǎn)的AAV產(chǎn)品能夠保證動(dòng)物試驗(yàn)所需的rAAV基因載體的質(zhì)量和產(chǎn)量。如果，你是正熱衷投身于AAV研究的科研迷，如果你和你的科研小伙伴還在為選擇何種AAV而苦惱？不要再猶豫了，歡迎關(guān)注上方微信公眾號(hào)，吉?jiǎng)P可以為你的一萬(wàn)個(gè)為什么答疑解惑！我們有專業(yè)的科研團(tuán)隊(duì)和優(yōu)質(zhì)的技術(shù)服務(wù)，誠(chéng)邀與您的合作！

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