• 根據(jù)需求提升檢測通量。

• 實現(xiàn)無看守運行、夜間運行或全流程自動化，顯著減少人工操作，提高效率。

• 更加一致的孔板處理，更加可靠的結(jié)果。

• 更好的環(huán)境控制維持良好的細胞狀態(tài)。

導言：

獲得一株穩(wěn)定高產(chǎn)的細胞系往往需要篩選成千上萬個細胞克隆。除了找到這些稀有的優(yōu)質(zhì)細胞系，研究人員還需要證明它們源自單個細胞(即單克隆性)以滿足FDA的要求。因此，研究人員需要耗費大量時間和精力用于篩選單細胞克隆。為了減輕這類負擔，Molecular Devices開發(fā)了CloneSelect Imager細胞成像分析系統(tǒng)，可以自動采集單個細胞的圖像并監(jiān)測其生長過程。這里我們展示了三個將CloneSelectImager與自動化流程整合以提高檢測通量的實例。

實例一是一個簡單的自動化解決方案，滿足每天檢測上千個克隆的通量需求。實例二允許更長時間(一般為2-3周)的自動監(jiān)測。實例三整合了克隆生長監(jiān)測與產(chǎn)物分析。

實驗一：自動加載孔板至細胞克隆成像儀

儀器構(gòu)成：CloneSelect Imager、機械臂和堆板架

雖然有多種方法可用于證明單克隆性，但是提供單細胞圖片的方法相對簡單、明確，是一種重要的方法。但是，采集數(shù)千個克隆的單細胞圖片是一個極其耗費精力的過程，尤其是只借助顯微鏡觀察的情形下。CloneSelect Imager可用于快速成像整個孔板，判斷每個孔內(nèi)是否只有一個細胞，并監(jiān)測其后續(xù)的生長。CloneSelect Imager獨立使用時一次只能成像一塊孔板，這就需要手工放入孔板。但是，通過將CloneSelect Imager與第三方的機械臂整合，可以在室溫下一次運行處理48塊孔板（圖1），從而顯著提高無看守運行時間至超過2小時。

實例二：自動從細胞培養(yǎng)箱取板成像并放回

儀器構(gòu)成：CloneSelect Imager、機械臂和培養(yǎng)箱

雖然案例一增加了每天的無看守運行時間，但是每天需要將孔板放入堆板架并在最后取回。此外，將孔板長時間放置于室溫，可能影響細胞活力。在這個案例中，我們通過機械臂將CloneSelect Imager與細胞培養(yǎng)箱連接(圖2)，從而減少對細胞活力的影響。這不僅減少了溫度波動，而且實現(xiàn)了更長時間(2-3周)的無看守運行，用戶不需要操作孔板，從而降低污染風險和差異。在這個實例中，我們整合了42孔板的培養(yǎng)箱，此外我們也可以提供更高容量的培養(yǎng)箱，可以放置大約200塊孔板。

實例三：自動從培養(yǎng)箱取板成像，并吸取上清進行下游分析

儀器構(gòu)成：CloneSelect Imager、機械臂、培養(yǎng)箱和液體工作站

監(jiān)測單細胞形成克隆之后便是檢測產(chǎn)量。有多種檢測方法實現(xiàn)這一目的， 包括ELISA法檢測抗體，如Molecular Devices的SpectraMax® i3x，或者使用免標記的方法，如ForteBio的Octet®系統(tǒng)。一般待克隆生長至一定大小后再吸取上清用于分析，但是考慮到克隆的生長速率不一致，人工逐一判斷并操作是一個耗時的過程。在這個自動化解決方案中，單細胞接種至多孔板后放入培養(yǎng)箱，并在隨后的2周內(nèi)由CloneSelect Imager監(jiān)測細胞生長(圖3)。在這期間，細胞匯合度超過80%的孔將被選出用于下游分析，從而解決了克隆生長速率不一致所產(chǎn)生的問題。Beckman Coulter的液體工作站可以將被選中孔的上清吸出并轉(zhuǎn)移到新的孔板用于下游分析。

小結(jié)：

縮短細胞系開發(fā)周期的需求與日俱增，如上所述的三個自動化解決方案可以實現(xiàn)無看守運行，提高檢測通量，并提供細胞系開發(fā)所需的證明材料(表1)。除了提高檢測通量外，這些自動化方案使用戶從重復勞動中解脫，并提供穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)。