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病毒包裝技術(shù)1——病毒與非病毒載體介紹

瀏覽次數(shù):1314 發(fā)布日期:2015-6-24  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
銳賽小課堂0617-106

基于轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的研究理念,銳賽知道,每一項(xiàng)臨床疾病的致病源頭或表象最初都是由個(gè)體體內(nèi)某個(gè)基因的突變導(dǎo)致了。所以每一項(xiàng)臨床疾病的研究,整體課題項(xiàng)目開(kāi)展的最初源頭也必須從一個(gè)基因開(kāi)始。
銳賽在多年的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中,在于各個(gè)臨床醫(yī)師的整體項(xiàng)目合作中,探討得出的不僅是轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)臨床研究課題的整體思路,一般實(shí)驗(yàn)方向,更有各個(gè)環(huán)節(jié)單項(xiàng)具體實(shí)驗(yàn)的操作紀(jì)要。
現(xiàn)將整體實(shí)驗(yàn)的一般實(shí)驗(yàn)方案,各單項(xiàng)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法在此分享給大家,不僅是為了大家實(shí)驗(yàn)室的需要更是為了進(jìn)一步提高轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的效率,為病患之需而行。

對(duì)于整體項(xiàng)目的一般實(shí)驗(yàn)思路:
基因-基因化學(xué)合成/調(diào)取-載體構(gòu)建-病毒包裝-穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建-細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)-動(dòng)物實(shí)驗(yàn)/臨床樣本分析-數(shù)據(jù)分析統(tǒng)計(jì),研究

病毒包裝技術(shù)1——病毒與非病毒載體


病毒載體的優(yōu)勢(shì)

特點(diǎn)

病毒載體來(lái)源于對(duì)病毒基因組進(jìn)行操作和改造,消除致病性基因,保留其感染活性,使之成為具有生物活性的基因載體。使它攜帶上外源基因被包裝成病毒顆粒就構(gòu)成了基因?qū)胂到y(tǒng) (gene delivery system)。


由于病毒的多樣性及與機(jī)體復(fù)雜的依存關(guān)系,人們至今對(duì)許多病毒的生活周期、分子生物學(xué)、與疾病發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系等的認(rèn)識(shí)還很不全面
,對(duì)其進(jìn)行改造在技術(shù)上有很大的局限,使不是所有病毒種類(lèi)都能被改造、消除其致病性用于人體。近20年,幾種病毒如反轉(zhuǎn)錄病毒(包括HIV 病毒)、腺病毒、腺病毒伴隨病毒、皰疹病毒(包括單純皰疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)被成功地改造成為基因轉(zhuǎn)移載體并開(kāi)展了不同程度的應(yīng)用。但是分子病毒學(xué)和生物技術(shù)手段的發(fā)展將反向遺傳學(xué)方法應(yīng)用到病毒載體構(gòu)建,使RNA病毒如Sindbis病毒、流感病毒、仙臺(tái)病毒等被成功地改造成病毒載體。
用于基因?qū)氩⒛茉谂R床開(kāi)展研究的病毒載體一般特點(diǎn)有

(1)攜帶外源基因并能包裝成病毒顆粒;

(2)能感染目的細(xì)胞并介導(dǎo)基因表達(dá);

(3)對(duì)人體不致病并不能在一般環(huán)境中傳播、增殖。

 

非病毒載體

非病毒載體包括質(zhì)粒DNA、反義寡核苷酸、Ribozyme、siRNA 等。常用與組成非病毒載體導(dǎo)入系統(tǒng)的物質(zhì)包括脂類(lèi)、多糖、多肽或蛋白質(zhì)、多聚組氨酸或多聚賴(lài)氨酸、多價(jià)陽(yáng)離子化合物、類(lèi)固醇等。用這些物質(zhì)不同的組合和配比來(lái)構(gòu)建能包裹于載體DNA或其它核酸物質(zhì),這類(lèi)“人工外殼”模擬細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)成分構(gòu)成脂質(zhì)體骨架。常見(jiàn)的成分有脂質(zhì)體、殼聚糖、多價(jià)陽(yáng)離子聚合物如PEI、多聚賴(lài)氨酸或組氨酸、多聚陽(yáng)離子化合物。同時(shí)加上靶向性多肽、毒來(lái)源的多肽、細(xì)胞膜融合、流感病毒HA蛋白的一個(gè)肽段幫助載體靶向?qū)搿⑷诤稀?/SPAN>從內(nèi)吞體中釋放等功能。但是目前非病毒載體導(dǎo)入系統(tǒng)在轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、顆粒均一性、穩(wěn)定性等方面仍不理想,因此限制了其進(jìn)一步發(fā)展的空間。
持續(xù)發(fā)布中......

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