目的

分離9-羥基利培酮的對映體，并將此方法應(yīng)用于監(jiān)測代謝過程中對映體的形成。

背景

許多候選藥物及其代謝物都含有一個或多個手性中心。識別和監(jiān)測可能存在的各種對映體是藥物開發(fā)過程中至關(guān)重要的一步。眾所周知，超臨界流體色譜（SFC）是一種可進(jìn)行手性分離的高效技術(shù)。此外，SFC還具有許多優(yōu)勢，例如分析效率高、分離速度快，以及使用的溶劑與MS兼容等。

解決方案

在本技術(shù)簡報中，我們展示了利用UPC^2®/MS/MS對利培酮的活性代謝物9-羥基利培酮進(jìn)行對映體分離和檢測。研究人員使用9-羥基利培酮標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行方法優(yōu)化，然后將其應(yīng)用于在人肝臟微粒體中溫育的利培酮樣品。實(shí)驗(yàn)監(jiān)測了從母體化合物到羥基代謝物的轉(zhuǎn)化過程。

UPC²與MS檢測的結(jié)合有助于9-羥基利培酮的對映體分離。圖1展示了采用沃特世（Waters^®） Trefoil CEL2 3×150 mm，2.5 μm色譜柱，以甲酸銨改性的甲醇為共溶劑所獲得的非手性利培酮及9-羥基利培酮的R和S構(gòu)型的優(yōu)化色譜圖。

本方法被用于分析t在0、15、30、60、90和120 min時淬滅的溫育樣品，以監(jiān)測從利培酮母體到9-羥基代謝物的轉(zhuǎn)化過程。圖2顯示了一個示例進(jìn)樣，其中9-羥基代謝物的兩個預(yù)期峰分別位于3.92和4.29 min處。然而，在4.48和
4.76 min處還出現(xiàn)了另外兩個峰，它們可能是文獻(xiàn)報道的少量7-羥基利培酮代謝物。¹我們將所獲得的母體化合物、利培酮以及四種羥基代謝物峰的峰面積對應(yīng)時間函數(shù)繪制成圖。如圖3所示，多數(shù)母體化合物在30 min內(nèi)轉(zhuǎn)化為代謝物。雖然R和S構(gòu)型無法得到絕對確證，但根據(jù)已發(fā)表的數(shù)據(jù)²顯示，該過程更傾向于形成R-9-羥基利培酮。因此，我們推測較早洗脫出的峰為R構(gòu)型，而第二個峰為S構(gòu)型。

總結(jié)

UPC²與MS檢測的結(jié)合有利于利培酮的活性代謝物9-羥基利培酮的對映體分離。分離化合物的不同手性構(gòu)型是藥物開發(fā)過程中至關(guān)重要的步驟。此外，我們還證明了合相色譜可成功應(yīng)用于代謝穩(wěn)定性研究。

參考文獻(xiàn)