Cell-Based ELISA簡介以及應(yīng)用
瀏覽次數(shù):2559 發(fā)布日期:2014-9-11
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1、Cell-Based ELISA 的優(yōu)點:
Cell-Based ELISA(基于細(xì)胞的 ELISA)是一種全新的ELISA技術(shù),有兩個最突出的優(yōu)點:
1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板:細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測的時候,將細(xì)胞固定在微孔板上并進行通透處理即可。這樣就避免了抽提蛋白時,由于客觀和主觀上引起樣品的損失而導(dǎo)致實驗結(jié)果在一定程度上偏離了實際情況。同時不用包被微孔板,簡化了實驗流程,有助于提高效率。科研人員在一個 96 孔酶聯(lián)板上,便能檢測目標(biāo)細(xì)胞蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的表現(xiàn)。由于省去抽提蛋白和裂解細(xì)胞的步驟,樣本的損失也能降到最低,比起其他普通的 ELISA 測定方法,這項全新的 ELISA 技術(shù)能更快速、更方便地一次檢測大量的細(xì)胞內(nèi)蛋白。
1.2 可同時檢測兩種不同蛋白:封閉后加入兩種抗不同蛋白且來源于不同宿主的一抗,然后再加入不同的二抗,加入兩種熒光底物,檢測兩個波長。同時檢測兩種蛋白的好處是顯而易見的,可以減少工作量,此外還可以滿足一些特殊的實驗需要,例如,需要測定某個蛋白的磷酸化比例,就需要測定磷酸化蛋白的數(shù)量和總蛋白的數(shù)量,這兩個測定在同一次實驗進行,有助于消除實驗誤差,得到更為精確的實驗結(jié)果。
2、Cell-Based ELISA 的兩種技術(shù):
某些公司發(fā)展了雙通道Cell-Based ELISA技術(shù);
雙通道與單通道Cell-based ELISA比較:
雙通道cell-based ELISA,顧名思義,即一次可以同時檢測兩種目的蛋白,R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是雙通道cell-based ELISA,原理略:(需要熒光檢測方式和相應(yīng)儀器);
單通道cell-based ELISA,即一次只能檢測一種目的蛋白,他和普通ELISA的主要區(qū)別在于樣品處理過程:
3、cell-based ELISA 的應(yīng)用:
該產(chǎn)品,最多發(fā)展起來的是用于檢測磷酸化和非磷酸化蛋白的相對含量;
4、有cell-based ELISA產(chǎn)品的公司:
目前,多家elisa 產(chǎn)品提供商均提供cell based elisa 試劑盒,如Rnd systems, raybiotech, ebioscience, millipore 等公司;
5、如何自己進行cell based elisa 實驗?
事實上,根據(jù)單通道的cell based elisa 原理,可以自己建立cell based elisa 實驗系統(tǒng);
細(xì)胞加入培養(yǎng)板中;
加入刺激物或者抑制劑進行培養(yǎng);
對細(xì)胞進行固定或者封閉;
加入第一抗體;
加入HRP 結(jié)合的二抗(二抗的選擇,同western blot);
加入底物進行顯色。