分子診斷技術大盤點
分子診斷技術盤點
分子診斷技術是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學技術通過檢測基因的存在、缺陷或表達異常，從而對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術。分子診斷技術為疾病的預測、診斷、預防、治療和轉(zhuǎn)歸提供了信息和決策依據(jù)，已廣泛應用于傳染病的診斷、流行病的調(diào)查、食品衛(wèi)生檢查、腫瘤和遺傳病的早期診斷及法醫(yī)鑒定等各個領域的研究。此次新冠疫情中，核酸檢測等分子診斷技術也發(fā)揮了極大的作用。
近年來，分子診斷技術發(fā)展迅速，目前主要分為四大類，分別是基于核酸分子的雜交技術的分子診斷技術、基于 PCR 技術的分子診斷技術、基于基因芯片技術的分子診斷技術和基于基因測序技術的分子診斷技術。
基于核酸分子雜交技術的分子診斷技術
互補的核苷酸序列通過Watson-Crick堿基配對形成穩(wěn)定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據(jù)所使用的探針已知序列進行特異性的靶序列檢測，常用的包括 Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、原位雜交、熒光原位雜交（FISH）等技術。
基于 PCR 技術的分子診斷技術
PCR技術，即聚合酶鏈式反應，指體外擴增目的核酸片段的技術。PCR技術主要包括實時熒光定量PCR和數(shù)字PCR。
實時熒光定量PCR技術的操作過程在封閉體系中進行，能夠有效降低污染概率，并且可通過對熒光信號監(jiān)測從而進行定量檢測，在臨床應用最為廣泛，已成為PCR中的主導技術。
數(shù)字PCR也稱為單分子PCR，是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術。該技術先將核酸模板進行稀釋，分配到大量獨立的反應單元中，使每個反應單元中只有單個模板分子，然后進行PCR擴增反應,擴增結(jié)束后對每個反應室的熒光信號進行統(tǒng)計學分析，來定量DNA拷貝數(shù)。
基于基因芯片技術的分子診斷技術
基因芯片技術的原理是將大量已知序列的核酸探針固定在基片表面，再將其與靶核苷酸雜交，通過對探針的檢測獲得待測樣品的序列信息�；蛐酒罁�(jù)探針的種類分為cDNA 微陣列芯片和寡核苷酸微陣列芯片。
基因芯片技術具有自動化程度高、操作簡單、通量高等特點，在基因分型、基因表達、單核苷酸多態(tài)性檢測等方面均有廣泛應用。
基于基因測序技術的分子診斷技術
以揭示疾病分子特征為目的的高通量測序（next generation sequencing，NGS）技術，已成為當前精準醫(yī)學的重要組成部分。NGS以其高效、廉價等特點顯示了在臨床分子診斷應用中的技術優(yōu)勢，為精準醫(yī)療提供了堅實的分子依據(jù)。
NGS技術與其他分子診斷技術相比，具有以下幾方面的優(yōu)勢：（1）通量高；（2）可以多重檢測。在同一批次的檢測中，除了可以檢測多個不同基因外，也可以同時檢測多個不同來源的樣本；（3）速度快;（4）自動分析；（5）測序成本低；（6）所需樣本量少；（7）可與其他基因檢測方法同時進行，NGS主要用于檢測基因變異�？傊琋GS技術能夠一次性對多個靶基因進行準確檢測，具有所需樣本量小、敏感性高、檢測成本低、耗時短等優(yōu)點。
四大主流分子診斷技術在臨床各領域的廣泛應用，為疾病的預防、診斷、治療等提供了科學有效的檢測數(shù)據(jù)，其技術的革新同時大大推動了精準醫(yī)療的發(fā)展。
在以上提到的多種技術中，由于人基因組中存在大量重復序列，涉及到探針與目標DNA雜交的技術都會面臨由于重復的DNA序列導致的非特異性雜交這一普遍問題。為了最小化重復序列造成的非特異性雜交，需要在雜交前采用人COT DNA對這些重復序列進行封閉。Cot-1 DNA封閉劑是大小通常為50到300 bp的DNA，并且富含重復DNA序列，如SINE（短散布的元素），LINE（長散布的元素）以及同一基因家族成員之間的同源性序列。
COT 1 Human DNA
COT 1人類DNA來自于德國GeneON，由人類胎盤DNA通過在富集重復元素的條件下打斷、變性和再退火制備獲得，平均片段大�。�50-300 bp，A260 / A280比率：約1.70，基因組量（非重復性DNA）小于5%，且經(jīng)檢測不含有HIV1、2 RNA，HCV RNA，HBV DNA，質(zhì)量可靠，性價比高，是您雜交捕獲實驗的最佳選擇。
