預(yù)期用途
此酶免試劑盒可用于流行性出血熱（EHF）病人血清中抗?jié)h坦病毒IgG和IgM的定性檢測。 

前言簡介
流行性出血熱（EHF）又稱腎病綜合征出血熱（HFRS），是由漢坦病毒(Hantaan type)引起的。與流行性腎病相比（因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染），HFRS的傳染性更嚴(yán)重，一般都會(huì)伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險(xiǎn)。

實(shí)驗(yàn)原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時(shí)，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實(shí)驗(yàn)過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會(huì)結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。

貯存及穩(wěn)定性
試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲(chǔ)存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期。

樣品采集和貯存
人血清

試劑盒成分

實(shí)驗(yàn)做需器材但試劑盒沒提供

• 精確微移液管  體積(5; 20; 50; 100; 200; 1000 µL)
• 渦旋混合器
• 保溫箱, 37°C
• 試管(用于樣品稀釋)
• 8道微量移液器
• 洗瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)
• 酶標(biāo)儀
• 雙蒸水或去離子水
• 吸水紙,吸嘴,計(jì)時(shí)器

實(shí)驗(yàn) 前準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前將試劑盒平衡至室溫(18-25°C).含結(jié)晶的緩沖濃縮液可在37°C下迅速將其溶解.實(shí)驗(yàn)前將其冷卻至至室溫(18-25°C) 


稀釋濃宿成分的準(zhǔn)備(以測32孔為例)
提示: 實(shí)驗(yàn)前取所需量試劑,并迅速用于稀釋.

樣品稀釋

提示: 未稀釋樣品可于-20°C下保持?jǐn)?shù)月

實(shí)驗(yàn)步驟
1 將100μl即用型陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控、參考對(duì)照質(zhì)控和稀釋血清樣品(如是IgM樣品,需用類風(fēng)濕因子吸附劑前處理)加入到相應(yīng)的微孔中。
2 膠粘薄膜蓋板，37℃下溫育45分鐘。
3 移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
4 每孔中加入100μl稀釋酶聯(lián)物(IgG 或IgM)
5 膠粘薄膜蓋板。37℃下溫育45分鐘.
6 移除膠粘薄膜, 棄除孔內(nèi)反應(yīng)液.每孔加入300μl稀釋洗滌液，重復(fù)洗板4次，在吸水紙上拍干去除殘留液滴。
7 加底物液和終止液,建議用8道微移液器,保證加液相等的時(shí)間間隔。避免產(chǎn)生氣泡。
8 每孔中加入100μl TMB底物液
9 室溫(18-25°C)溫育10分鐘
10 每孔中加入100μl終止液終止底物液反應(yīng)。
11 20分鐘內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值。（參考波長：650nm）

8 、結(jié)果計(jì)算
用病人樣品的OD值比上參考對(duì)照質(zhì)控的OD值計(jì)算檢驗(yàn)結(jié)果
A_病人樣品 / A_{參考對(duì)照質(zhì)控} = Q 

• IgG抗體：

• IgM抗體：

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。