Tracy Yuan（原銓，上海美凱純生物科技有限公司）

 

BioFirst快速微生物檢測方法因其具有高度的自動化、顯著縮短報告結果時間、操作簡便、無需對員工做過多培訓、更快的產品放行和改善過程控制等特點而受到越來越多的關注。但在采用快速檢測方法之前必須滿足3個條件：(1)符合GMP規(guī)則；(2)與標準方法（如國標法）進行驗證；(3)確保投資能得到回報。本文闡述可如何實現(xiàn)上述三個條件以及快速微生物的優(yōu)勢。

 

食品藥品生產企業(yè)需采取措施確保產品不受有害微生物污染。要做到這一點就必須檢測從原材料、中間產品到終端產品中的相關微生物。

 

傳統(tǒng)的平板方法檢測微生物需要較長的培養(yǎng)時間、訓練有素的微生物實驗員和煩瑣的操作過程，已經成為了產品放行的瓶頸；而更簡便的替代檢測方法如快速微生物檢測方法（RMM’s）可以很好地解決這些問題。當評估一種替代檢測方法時，有三個關鍵問題需要考慮：(I)系統(tǒng)是否進行過驗證？(II)是否符合GMP的規(guī)定？(III)投資回報率如何？

 

2010年10月實施的新版中國藥典也給出了“微生物快速檢驗替代方法驗證指導”，明確指出企業(yè)經過相關驗證后可以采用快速微生物檢測方法。2015年該指導原則成為藥典的附件。

 

 

Bio First博樂美凱系統(tǒng)已被驗證符合cGMP  BioFirst微生物實時熒光光電檢測系統(tǒng)是一種特意為營養(yǎng)保健品、食品、化妝品、制藥、水處理等行業(yè)設計的快速微生物檢測方法。下面是關于BioFirst系統(tǒng)驗證工作的簡要說明。

1、BioFirst系統(tǒng)與USP方法的平行對比試驗：每種對比試驗均采用200個以上干凈和自然污染的營養(yǎng)保健品和膳食添加劑樣本進行試驗，

2、特異性（也稱為兼容性和排斥性）：包括測試每種檢測管以確保每種菌株能被檢出。結果表明每種檢測管均表現(xiàn)出優(yōu)異的兼容性和排斥性。

3、檢測限被定義為通過該方法能檢測出的微生物的最低水平。第一次試驗中所有樣本按1.2 cfu/g進行接種，第二次試驗按1.5 cfu/g進行接種。結果顯示BioFirst系統(tǒng)的檢測限等同或高于平板計數方法，接近于能檢測出培養(yǎng)基里一個細菌生長的能力。在許多情況下一個菌能在BioFirst檢測管里被檢出而平板法則不能檢出；20份細菌數在1-2個CFU水平的樣本中BioFirst系統(tǒng)檢測出其中的16份，而平板計數方法只檢測出12份，數據如下表所示。

 

 

 

4、重現(xiàn)性：指采用自然污染樣本和接種各種菌株的樣本來檢查每種培養(yǎng)基的標準差（SD）。以下4個曲線圖顯示該方法具有良好的重現(xiàn)性。

 

 

5、耐用性：包括檢查當測試參數發(fā)生微小變化時系統(tǒng)的表現(xiàn)情況，對于BioFirst系統(tǒng)，參數包括儀器孵育溫度變化的影響、樣本大小的影響和檢測管里培養(yǎng)基體積的影響，耐用性在不同的培養(yǎng)基里被重復測試。結果證明該系統(tǒng)非常耐用且不受有意在方法參數上進行細小變化或在多種不同條件下的影響。

6、穩(wěn)定性：測試面臨多種檢測條件的挑戰(zhàn)時系統(tǒng)所表現(xiàn)出的精確性。也就是測量在不同的正常檢測條件下，例如不同的分析員、儀器或試劑批號時，分析同樣樣本所獲得的檢測結果的精確程度。BioFirst系統(tǒng)表現(xiàn)出很好的穩(wěn)定性且得到高精確度的檢測結果。

7、假陰性：是指一份被接種或自然污染的樣本在參考方法（平板計數）中為陽性結果而在替代方法中為陰性。在進行細菌總數和霉菌酵母菌檢測時BioFirst系統(tǒng)顯示沒有假陰性而USP平板計數方法有一個假陰性。

8、假陽性：是指一份沒有被接種目標菌的樣本在系統(tǒng)中得到陽性結果而在平板計數方法中得到陰性結果。在4類樣本的測試中，細菌總菌檢測BioFirst系統(tǒng)出現(xiàn)了2.5%的假陽性率，霉菌和酵母菌檢測沒有發(fā)現(xiàn)假陽性。

 

上述驗證過程表明在客戶選用BioFirst系統(tǒng)后，通過提供IQ和QQ文件及平行對比試驗，BioFirst將可以為客戶提供一整套驗證程序。

 

越來越多的公司發(fā)現(xiàn)采用傳統(tǒng)的微生物檢測方法或者是將樣本送到外部實驗室進行微生物檢測是一項煩瑣、耗時的工作，而且并不一定省錢。與之相反，采用快速微生物檢測方法的優(yōu)勢是可以將報告檢測結果的時間從7-10天縮短到5-48小時（霉菌）。這樣可以使企業(yè)更快的對污染做出反應、加快產品放行速度、更快的將產品投放到市場、節(jié)省倉儲空間和強化產品質量。RMM的優(yōu)勢還包括更高的精確性、更好的靈敏性、增加樣本檢測量、自動采集數據和更方便的數據處理、減少產品放行方面的花費等。

購買BioFirst系統(tǒng)的費用主要包括固定資產投資和一次性檢測管的使用。雖然一瓶一次性檢測管的價格高于一塊普通瓊脂平板，但由于BioFirst系統(tǒng)不需要做梯度稀釋，因此檢測一份樣本只需用1個檢測管，而平板計數方法通常需要4-6塊平板。此外，快速檢測系統(tǒng)潛在節(jié)省的花費包括：縮短產品放行的時間、不需要過多的檢驗人員、更低的后處理費用、減少工廠待工時間、減少原材料、中間產品和終產品的庫存時間、降低招回機率、增加產品的靈活性等；從而更好的提升和保護公司形象。