1 介紹
新的優(yōu)化的快速肽合成方法，結(jié)合平行多肽合成儀器，可以高通量地生產(chǎn)肽庫。

使用 Symphony X 全自動(dòng)高通量多肽合成儀探索合成方案的優(yōu)化，通過在偶聯(lián)步驟后去除 DMF 洗滌來減少循環(huán)時(shí)間并減少溶劑消耗和廢液產(chǎn)生。

2 方法和分析
使用 Fmoc-Gly-Wang 樹脂（取代度 0.32 mmol/g）在 Symphony X 多肽合成儀上以 20 μmol 的規(guī)模合成 ^65-74ACP 肽。在室溫下，用 20% Pip（DMF 中）進(jìn)行兩次脫保護(hù)，每次 2.5 分鐘。洗滌：DMF 6 x 30 秒。在室溫下，以 100 mM AA（10 當(dāng)量）、100 mM HCTU（10 當(dāng)量）和 200 mM NMM（20 當(dāng)量）的最終濃度進(jìn)行偶聯(lián)，每次 2 x 5 分鐘。使用的裂解混合物是 TFA/Anisole/H₂O/EDT，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行 2 小時(shí)。對每個(gè)肽進(jìn)行三次重復(fù).

將所得粗肽溶解于水中，使用 Varian ProStar HPLC 進(jìn)行分析，使用 C18、180 Å、5 um、250 x 4.6 mm 柱（Agilent Polaris），流速為 1 mL/min，使用 5-95% B 梯度洗脫，其中緩沖液 A 為含 0.1% TFA的水，緩沖液 B 為含0.1% TFA的乙腈。檢測波長為 214 nm。質(zhì)譜分析在配備 C18、100 Å、2.6 um、50 x 2.1 mm 色譜柱 (Phenomenex Kinetex) 的 Shimadzu LCMS-2020 Single-Quad 質(zhì)譜儀上進(jìn)行，分析時(shí)間為 7 分鐘，流速為 1 mL/min，梯度為 5-50% B洗脫，其中緩沖液 A 為含 0.1% 甲酸的水，緩沖液 B 為含0.1% 甲酸的乙腈。

3 結(jié)果
通過減少偶聯(lián)后的清洗次數(shù)，優(yōu)化了 ^65-74ACP 的合成。消除偶聯(lián)后清洗可將循環(huán)時(shí)間從 2.8 分鐘縮短至 2.3 分鐘，并將溶劑消耗量從 55 毫升縮短至 41 毫升，而不會(huì)顯著影響最終肽的純度（表 1）

表 1 洗滌方案對肽純度、循環(huán)時(shí)間和溶劑消耗的影響。肽序列：VQAAIDYING

• 整體循環(huán)時(shí)間縮短 20%
• 整體溶劑消耗量減少 25%
• 純度幾乎保持不變
• 肽合成時(shí)間和成本整體改善

• 24個(gè)獨(dú)立反應(yīng)通道
• 支持原位活化和預(yù)活化
• 8個(gè)試劑瓶，40個(gè)氨基酸位置
• Single-Shot^TM特殊氨基酸傳輸技術(shù)
• 內(nèi)置專利設(shè)計(jì)的PurePep Pathway流路系統(tǒng)
• 紅外加熱（選配，第一個(gè)通道）
• IntelliSynth^TM UV監(jiān)測（選配，第一個(gè)通道）
• 肽預(yù)測軟件
• 遠(yuǎn)程郵件提醒
• 軟件設(shè)計(jì)符合21 CFR Part 11合規(guī)性
• 自動(dòng)原位切肽
• 自動(dòng)多肽純化