TiYOTM 采用光漂白LED技術(shù),強(qiáng)力淬滅自體熒光,大幅提高信噪比,呈現(xiàn)清晰無(wú)比的熒光圖像。特別適用于處理高度自發(fā)熒光的樣本。在使用TiYOTM時(shí),您是否對(duì)于如何操作它還有很多的疑問(wèn)?無(wú)從下手?
當(dāng)遇到操作問(wèn)題,如何解決呢?
Q:TiYOTM是在染色前還是染色后使用?
A:在染色前使用TiYOTM
Q:是否只需在裝滿PBS的托盤(pán)中放置好組織切片就可以用TiYOTM進(jìn)行淬滅?
A:對(duì)于自體熒光較弱的樣品,只需將其插入TiYOTM就能獲得淬滅效果。若要獲得更充分的淬滅效果,我們建議先在室溫下用3%過(guò)氧化氫/甲醇預(yù)處理10min,PBS沖洗5min,再進(jìn)行淬滅操作。
Q:TiYOTM可以用于活細(xì)胞嗎?
A:不可以;罴(xì)胞會(huì)受到TiYOTM的強(qiáng)LED照射,光刺激會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷,細(xì)胞即使未死亡也會(huì)受到影響。我們建議使用經(jīng)過(guò)多聚甲醛(PFA)、福爾馬林等固定后的樣品。
Q:人腦樣品進(jìn)行2h淬滅后,會(huì)出現(xiàn)管狀信號(hào)。有什么解決辦法嗎?
A:對(duì)于腦和肝組織,如果條件允許,推薦采用灌注固定的方法。此外,血細(xì)胞會(huì)發(fā)出很強(qiáng)的自體熒光,所以就排出血液而言,灌注固定是個(gè)很好的方法。如果仍有血細(xì)胞殘留,建議在灌注固定液之前先用含肝素的PBS對(duì)組織進(jìn)行一次回流沖洗。成功進(jìn)行灌注固定的關(guān)鍵在于要保持固定液處于低溫狀態(tài)。
Q:可以使用表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(mCherry)的樣品嗎?
A:不僅自體熒光,像GFP或mCherry這樣的熒光也會(huì)被淬滅。如果您想使用表達(dá)GFP或mCherry的樣品,在淬滅后可以通過(guò)抗體染色的方法來(lái)檢測(cè)GFP或mCherry,不過(guò)這樣做可能會(huì)比較耗時(shí)。
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