”胚胎體（EBs）中內(nèi)皮分化的誘導(dǎo)。圖示為共聚焦顯微鏡圖像，展示了（A）ACVRL1wt/wt和（B）ACVRL1wt/mut胚胎體在內(nèi)皮誘導(dǎo)后CD31+細胞的出現(xiàn)。使用Phalloidin標(biāo)記F（絲狀）-肌動蛋白細胞骨架，DAPI用于染色細胞核。（C，D）使用抗平滑肌肌動蛋白的抗體對胚胎體進行染色，以檢測可能的周細胞結(jié)構(gòu)。”

作者：Xiang-Tischhauser 等人（2023）
期刊: Cells
出版日期: 2023年6月

卷號: 12(12)

文章編號: 1600

利用臺式生物反應(yīng)器平臺在完全定義條件下標(biāo)準(zhǔn)化生成來源于人類iPSC的造血類器官和巨噬細胞

在這項研究中，使用CERO3D孵化器和生物反應(yīng)器生成3D造血類器官，以生產(chǎn)iPSC衍生的巨噬細胞。研究提出了一種新方法，利用無外源動物成分和化學(xué)定義的生物反應(yīng)器平臺生產(chǎn)免疫細胞。文章特別聚焦于從來源于誘導(dǎo)多能干細胞（iPSCs）的3D造血類器官中持續(xù)生成具有功能性和表型相關(guān)的巨噬細胞（iPSC-Mac）。研究人員展示了從三種不同的分化iPSC系中高效且持續(xù)地產(chǎn)生巨噬細胞的能力，且所生產(chǎn)的巨噬細胞具有一致且可重復(fù)的表型和功能特征。所生成的iPSC-Mac可以作為測試免疫調(diào)節(jié)藥物的模型。
 

 

作者：Ackermann 等人（2024）
期刊: Stem Cell Research & Therapy
出版年份: 2024
卷號: 15
文章編號: 171

可擴展生成功能性人類iPSC衍生的CAR-巨噬細胞，有效清除CD19陽性白血病
在這項研究中，使用CERO生物反應(yīng)器進行CAR-iMacs的持續(xù)擴增生產(chǎn)。研究重點展示了造血類器官的形成，這些器官持續(xù)釋放CAR-iMacs。研究者在不同的時間點從正在進行的生物反應(yīng)器分化過程中收獲了CAR-iMacs，這些細胞來自上清液。

本文提供了使用現(xiàn)代擴增技術(shù)從不同干細胞來源生成CAR-巨噬細胞的結(jié)果，這些技術(shù)用于下一代免疫細胞培養(yǎng)。生成的細胞表現(xiàn)出增強的功能，包括增強的抗原依賴性吞噬作用，能夠吞噬CD19+目標(biāo)癌細胞，同時伴有增強的促炎反應(yīng)。
 

作者：M. Abdin 等人（2023）
期刊: Journal for Immunotherapy of Cancer
出版年份: 2023
卷號: 11(12)
文章編號: e007705

生成同基因異質(zhì)合成ACVRL1(wt/mut)基因敲除iPS細胞系，用于HHT2相關(guān)血管生成的體外研究

本研究中，CERO3D培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器與海藻酸鹽微載體結(jié)合用于hPBMCs的培養(yǎng)。
本文報道了人外周血單核細胞（hPBMCs）在體外促炎狀態(tài)下的研究。文章旨在調(diào)查在應(yīng)對疾病或阿爾茨海默病特異性細胞毒分子時，細胞因子的釋放變化。研究觀察了TNFa和p40的細胞內(nèi)含量。
 

藍色：DNA+DAPI
紅色：rAβ42+CRANAD-2
“激光掃描共聚焦顯微鏡下，懸浮hPBMCs（n = 50，1n = 單個分析細胞）在與rAβ42（15 nM）孵育24小時后的代表性3D影像（A）。數(shù)據(jù)集由感興趣區(qū)域（ROI，x–z平面）中4個光學(xué)切片組裝而成，步長為1 μm（B–E）。藍色 – 核DNA由DAPI染料染色；紅色 – rAβ42由CRANAD-2染色。標(biāo)尺 = 5 μm。”

作者：Kot等人
期刊：Front. Neurosci.
卷號：第18卷
出版年份：2024

溶血磷脂酸通過誘導(dǎo)自噬活性抑制高級別漿液性卵巢癌細胞的凋亡，并通過EGFR-PI3K/AuroraAThr288-geminin雙重信號通路促進細胞周期進展

在本研究中，CERO 3D 培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器用于培養(yǎng)A2780細胞和OVCAR5類胚體懸浮培養(yǎng)。

研究人員顯示，溶血磷脂酸（LPA）可以通過誘導(dǎo)自噬活性抑制高級別漿液性卵巢癌細胞的凋亡，并通過EGFR-PI3K/Aurora-AThr288-geminin雙重信號通路促進細胞周期進展。

該研究為增強HGSOC精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的臨床效益提供了潛在靶點。
 

“生物反應(yīng)器擴增的A2780細胞在指示的培養(yǎng)天數(shù)的代表性相位對比圖像。標(biāo)尺：20 μm。”

作者：Zhao等人
期刊：Front Pharmacol.
卷號：第13卷
文章編號：1046269
出版年份：2022

面向應(yīng)用的人類iPSCs在冷凍袋中的大宗冷凍保存，隨后直接接種于可擴展懸浮生物反應(yīng)器中進行擴增和神經(jīng)分化

在本研究中，CERO 3D 培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器用于不同人類iPSC系的培養(yǎng)及其神經(jīng)分化。

本文展示了對人類iPSC系UKKi011-A和BIONi010-C-41的大宗冷凍保存研究，這些干細胞在再生醫(yī)學(xué)中具有潛在的應(yīng)用。文章討論了用于大宗冷凍保存的方法，以及冷凍細胞解凍后接種到可擴展懸浮生物反應(yīng)器中進行擴增和神經(jīng)分化的結(jié)果，最后得出結(jié)論，認為該技術(shù)有助于避免前期培養(yǎng)，從而實現(xiàn)時間和成本效益高的治療方法，且能處理大量細胞。
 
“UKKi011-A和BIONi010-C-41細胞在接種到可擴展生物反應(yīng)器前后的形態(tài)學(xué)變化。（A）工作流程的簡化示意圖。hiPSC系UKKi011-A和BIONi010-C-41采用慢速冷凍法在冷凍管（1 mL，總計2 × 10⁷細胞）和冷凍袋（50 mL，總計1 × 10⁹細胞）中以2 × 10⁷細胞/mL的密度進行冷凍保存，并在解凍后直接接種到CERO 3D懸浮生物反應(yīng)器中（= 干性維持）。（B）相差顯微鏡圖像顯示了兩種細胞系在冷凍保存前的2D形態(tài)學(xué)。標(biāo)尺表示200 μm。（C）代表性相差顯微鏡圖像，展示了UKKi011-A類胚體在懸浮生物反應(yīng)器中第1天和第3天的形態(tài)變化。對于非冷凍樣本，展示了冷凍管和冷凍袋中冷凍保存樣本解凍后的第1天和第3天的形態(tài)學(xué)變化。標(biāo)尺表示500 μm。”

作者：Meiser等人
期刊：Cells
出版日期：2023年7月
卷號：第12卷
期號：第14期

重現(xiàn)神經(jīng)外胚層暴露的造血祖細胞，實現(xiàn)在大規(guī)模生產(chǎn)可冷凍保存的iPSC衍生人類小膠質(zhì)細胞

在本研究中，CERO 3D 培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器用于大規(guī)模生產(chǎn)來自人類iPSC的胚胎體，并且共培養(yǎng)含有iPSC衍生小膠質(zhì)細胞（iPSdMiG）的皮層類胚體培養(yǎng)物，培養(yǎng)周期為1至4周。

該研究提供了利用誘導(dǎo)多能干細胞（iPSCs）生產(chǎn)人類小膠質(zhì)細胞的信息，后者是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的固有免疫細胞。本文展示了一種大規(guī)模生產(chǎn)和冷凍保存iPSC衍生小膠質(zhì)細胞（iPSdMiG）的體外分化方法，這些小膠質(zhì)細胞具有與成人人類小膠質(zhì)細胞高度相似的轉(zhuǎn)錄組特征，且對典型小膠質(zhì)細胞標(biāo)志物呈免疫陽性，能夠分泌促炎細胞因子，參與吞噬活性，產(chǎn)生反應(yīng)性氧種，并且適用于神經(jīng)2D和3D系統(tǒng)中的共培養(yǎng)研究。
 

        大規(guī)模胚胎體（EB）生產(chǎn)                                                     iPSdMiG分化與擴增

“示意圖展示了通過大規(guī)模生產(chǎn)胚胎體（EB）生成iPSdMiG的過程，這些胚胎體既表現(xiàn)出原始造血作用，又包含早期神經(jīng)前體，并隨后在網(wǎng)狀宏載體上進行擴增。小膠質(zhì)細胞可以從第6周到第12周的分化過程中持續(xù)收獲。”
 

“C 代表性免疫熒光圖像顯示，iPSdMiG（IBA1，紅色）遷移到并均勻分布在3D皮層類胚體中（TUBB3，綠色）；細胞核用DAPI染色。標(biāo)尺=500 μm。
D 高倍放大圖像揭示，集成的iPSdMiG（IBA1，紅色）在與3D皮層類胚體（TUBB3，綠色）共培養(yǎng)4周后表現(xiàn)出分支形態(tài)。標(biāo)尺=100 μm。”

作者：Mathews等人
期刊：Stem Cell Reviews and Reports
出版年份：2022
iPSC及其衍生物在多個譜系中的可擴展擴增

本文討論了誘導(dǎo)多能干細胞（iPSCs）在各種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的使用，特別是用于毒性測試。作者描述了使用CERO 3D懸浮培養(yǎng)平臺和臺式生物反應(yīng)器進行iPSCs可擴展生產(chǎn)的策略。文章還報告了最近的工作，旨在建立穩(wěn)健的可擴展分化方案，涉及心臟、神經(jīng)和肝臟命運，以增加可用的研究工具。
 

在3D培養(yǎng)條件下培養(yǎng)和擴增iPSCs。
A：3D懸浮培養(yǎng)的工作流程選項。
A1：iPSC團塊被接種在Matrigel涂層的海藻酸鹽微載體上。
A2：iPSC單細胞被接種在Matrigel涂層的海藻酸鹽微載體上，培養(yǎng)基中添加了10 μM Y-27632。
A3：iPSC單細胞懸液在ROCK抑制劑Y-27632的支持下形成聚集體。
B：作為團塊和單細胞在Matrigel涂層的海藻酸鹽微載體（MC）和聚集體上的細胞形態(tài)。細胞系UKBi005-A用于微載體方法，細胞系BIONi010-C用于聚集體方法。標(biāo)尺=500 μm。

作者：Keong Kwok等人
期刊：Reprod Toxicol.
出版日期：2022年5月17日
文章編號：S0890-6238(22)00068-5

人類iPSC衍生肝細胞在2D和3D懸浮培養(yǎng)中的冷凍保存與體外毒性研究

本文討論了誘導(dǎo)多能干細胞（iPSCs）在各種生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的使用，特別是用于毒性測試。作者描述了使用CERO 3D懸浮培養(yǎng)平臺和臺式生物反應(yīng)器進行iPSCs可擴展生產(chǎn)的策略。文章還報告了最近的工作，旨在建立穩(wěn)健的分化方案，涉及將iPSCs分化為肝細胞，并通過生物反應(yīng)器平臺進行大規(guī)模培養(yǎng)。這些工作有助于提升iPSCs在毒性測試等應(yīng)用中的潛力。
 

作者：Altmaier等人
期刊：Reproductive Toxicology
卷號：第111卷
出版日期：2022年8月
頁碼：68-80頁

人類多能干細胞在動態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)中功能性分化及可擴展生產(chǎn)腎臟近端小管上皮細胞

本文介紹了一種大規(guī)模生產(chǎn)人類多能干細胞（hPSC）衍生的腎臟近端小管上皮細胞（PTEC）的方案。研究人員成功地在懸浮生物反應(yīng)器中擴增hPSC，并使用CERO 3D培養(yǎng)箱（前身為BioLevitator）在基質(zhì)涂層的海藻酸鹽珠上將其分化為PTEC。文章解釋了PTEC在血液清除、體內(nèi)穩(wěn)態(tài)維持、廢物排除和前尿中物質(zhì)的主動重吸收中具有重要作用。PTEC可用于模擬藥物引起的腎毒性。
 

“人類iPSC衍生肝細胞在懸浮培養(yǎng)（3D）中的分化流程概述。第一步是建立穩(wěn)健的2D分化方案，將肝細胞（HLCs）從初始階段分化至成熟階段。第二步，將該方案轉(zhuǎn)化為CERO 3D（OLS）懸浮生物反應(yīng)器中的3D培養(yǎng)模式。最后，在兩個分化時間點（第8天和第21天）對肝臟類器官進行冷凍保存，以評估存儲效率。分化過程中和解凍后的恢復(fù)過程中進行的不同質(zhì)量控制（QC）展示了肝臟類器官的質(zhì)量。”

作者：Ngo等人
期刊：Cell Prolif.
出版日期：2022年3月
卷號：第55卷
期號：第3期
文章編號：e13190

人類iPSC衍生肝細胞在2D和3D懸浮培養(yǎng)中的冷凍保存與體外毒性研究

在本研究中，CERO 3D培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器用于無支架的肌球體形成和擴增。

本研究討論了使用中型培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器混合系統(tǒng)生產(chǎn)無支架的肌源性類球體。文章比較了來自初代豬肌肉細胞的類球體與來自C2C12細胞系的類球體，觀察并比較了它們的形態(tài)、增長參數(shù)、標(biāo)志物表達和肌源性潛力。
 

“懸浮培養(yǎng)中的肌球體形成。C2C12（a）和豬初級肌肉細胞（PMCs，(b)）分別以200,000或100,000個細胞/mL的密度接種到CERO 3D培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器（OLS）中，并對7天內(nèi)的肌球體形成進行分析。在所有時間點均觀察到大量圓形肌球體。底部圖像（右側(cè)）顯示了第4天肌球體的放大圖。標(biāo)尺：200 μm。”

作者：Stange等人
期刊：Cells
出版日期：2022年5月
卷號：第11卷
期號：第9期
文章編號：1453

用于高效體外研究納米顆粒配方的微流控3D腸道腫瘤類胚體模型

在本研究中，使用CERO 3D培養(yǎng)箱和生物反應(yīng)器生成來自人類結(jié)腸癌細胞系HT29-MTX-E12的腫瘤類胚體。

本文提供了一個微流控3D腸道腫瘤類胚體模型的開發(fā)信息，該模型允許測試功能化納米顆粒及其通過粘液層的滲透。引言指出口服給藥是首選方式，口服藥物的有效性依賴于生物利用度。

納米顆粒是改善醫(yī)療治療的重要工具，因此，可以通過體外測試來評估納米顆粒藥物傳遞系統(tǒng)的靶向輸送和效果。
 

“生成的HT29-MTX-E12細胞系3D腫瘤類胚體的表征
A) 活死細胞染色：使用熒光染色法同時標(biāo)記存活細胞（calcein-AM，綠色）和死亡細胞（碘化丙啶（PI），紅色）。
B) 組織學(xué)染色的類胚體：核快速紅 – 細胞核；Alcian藍 – 酸性黏多糖和醋酸黏蛋白。
C) 類胚體的掃描電鏡圖像；
D) 掃描電鏡圖顯示表面微絨毛。”

作者：Elberskirch等人
期刊：Journal of Drug Delivery Science and Technology
卷號：第63卷
出版日期：2021年
文章編號：102496