近期，日本有多人在服用小林制藥公司生產(chǎn)的含紅曲成分保健品后因腎臟疾病住院甚至死亡。此事件把日本百年藥企小林制藥，推上了風口浪尖。同時，也讓紅曲再次進入了大眾的視野。
關(guān)于紅曲

紅曲也叫紅曲紅、紅曲霉、紅曲米等，其作為一種天然發(fā)酵產(chǎn)物，其成分相對復(fù)雜，包括多種具有生物活性的物質(zhì)。其用糯米蒸制后接種紅曲菌種，發(fā)酵繁殖的，產(chǎn)品是發(fā)酵后的暗紅色糯米，經(jīng)粉碎后成為紅曲粉。它在食品工業(yè)中應(yīng)用十分廣泛，南方做燒肉或豆腐乳多使用。

同時，紅曲還具有降壓降脂、活血化瘀、健脾消食的功效。在保健品和藥品中也有廣泛應(yīng)用。

1、降壓降脂：紅曲可以降低血液黏稠度，提高血管舒張能力，恢復(fù)血管的彈性，降低血管的外周阻力，促進血壓平穩(wěn)下降。而且紅曲中還含有他汀類物質(zhì)，能降脂。所以紅曲具有調(diào)節(jié)血壓、降低血脂的功效。

2、活血化瘀：紅曲可以活血化瘀，主治產(chǎn)后惡露不盡、瘀滯腹痛、跌打損傷。

3、健脾消食：紅曲可以健脾消食，主治飲食停滯、胸膈滿悶、消化不良或赤白下痢。

紅曲的相關(guān)標準：

根據(jù)國家標準GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》及其增補公告，紅曲米及紅曲紅作為著色劑可用于腐乳、碳酸飲料 、果凍、糕點、配制酒等多種食品中，其中風味發(fā)酵乳中的最大使用量不得超過0.8 g/kg，糕點中的使用量不得超過0.9 g/kg，焙烤食品餡料及表面用掛漿不得超過1.0 g/kg，其他允許使用的食品則可根據(jù)生產(chǎn)需要適量使用。

另外鑒于紅曲中桔青霉素的危害，國家也設(shè)定了限量標準，GB 1886.181-2016《食品安全國家標準 食品添加劑 紅曲紅》中規(guī)定紅曲紅中桔青霉素的限量為0.04 mg/kg。

桔青霉素親和柱簡介

參考《GB/T 5009.222-2016 食品安全國家標準食品中桔青霉素的測定》，樣品經(jīng)提取液提取、過濾、稀釋，然后通過鍵合有桔青霉素特殊抗體的免疫親和柱。此時，桔青霉素被親和柱中的抗體特異性吸附，用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇使抗體變性，從而將桔青霉素從親和柱上洗脫下來。最后，用HPLC或液質(zhì)方法進行定量檢測。

桔青霉素親和柱規(guī)格：

柱容量：100ng/250ng

包裝：25支/盒，1ml，3ml

保存：2-8℃

保質(zhì)期：18個月

使用對象

本方法適用于紅曲制品、糧食、食品、飼料、調(diào)味品、藥材和酒類等樣品中桔青霉素的測定

實驗溶液制備

1)      提取液，甲醇/水（7+3）：取70mL甲醇加30mL水，混合均勻。
2)     pH7.0 PBS溶液：Clover pH7.0 PBS鹽包（貨號：C3001）：將鹽包用1000ml純水直接溶解，備用。保質(zhì)期18個月。
3)      0.1%吐溫 20-PBS 溶液:準確移取 1mL 吐溫-20 以pH 7.0 PBS緩沖溶液定容至 1000mL�；�10倍濃縮0.1%吐溫PBS緩沖液（貨號：G1112-C）直接稀釋10倍使用。
4)      0. 1% 磷酸溶液:準確移取 1mL 磷酸加水定容至 1000mL。
5)      洗脫液 :甲醇-0. 1% 磷酸溶液( 70+30 ) 取70mL甲醇加30mL0. 1% 磷酸溶液( 70+30 )，混合均勻。

樣品前處理：

1、紅曲及其制品：

稱取5g磨細的樣品，置于250mL錐形瓶中，或勻質(zhì)杯中。加入100mL甲醇/水（7+3）溶液。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min。將提取物到入槽紋濾紙或普通濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。移取1mL上步的濾液，置于干凈的容器中。用39 mL pH 7.0 PBS溶液：稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

2、大米，玉米，辣椒等

稱取10g磨細的樣品，置于150mL錐形瓶中，或勻質(zhì)杯中。加入50mL甲醇/水（7+3）溶液。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min。將提取物倒入槽紋濾紙或普通濾紙上，濾液收集于干凈的容器中。移取1mL上步的濾液，置于干凈的容器中。用49 mL pH 7.0 PBS溶液：稀釋，混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器，濾液收集于玻璃注射器筒中，量取10mL準備上柱凈化。

親和柱凈化程序：

將上步10 mL濾液，以1滴/秒的流速全部通過免疫親和柱，直至空氣進入到親和柱中。用10 mL pH 7.0 PBS溶液或0.1%吐溫 20-PBS溶液以1-2滴/秒的流速淋洗親和柱。用1mL 洗脫液（甲醇-0. 1% 磷酸溶液70+30）以1 滴/秒的流速淋洗親和柱，將所有樣品洗脫液收集于玻璃測試管中，混勻，注入HPLC檢測。

液相色譜條件：

色譜柱：Cloversil-C18 4.6*150mm（5um）

流速：0.8mL/min

檢測器：熒光檢測器，激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長500nm;

進樣體積：20~100uL

流動相1：0.1%磷酸:乙腈=35:65(V/V)

流動相2：流動相 A 液:乙腈，流動相 B 液:0. 1% 磷酸。

流動相及梯度洗脫條件見表

 

時間 /min	乙腈  /  %	0. 1% 磷酸  /  %
0	40	60
1	40	60
7	90	10
9	90	10
10	40	60
15	40	60

 

實驗圖譜及數(shù)據(jù)：

高效液相色譜儀桔青霉素標準品（50ppb)譜圖如下：

紅曲粉樣品加標(2000ppb)譜圖如下：

添加回收實驗數(shù)據(jù)如下：

	紅曲粉樣品1	紅曲粉樣品2
本底（ppb）	0.00	845
加標2000ppb	2026	2820
回收率	101%	99%

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檢測桔青霉素產(chǎn)品配置清單：

編號	產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱
1	IAC109	CLOVER桔青霉素親和柱（配套鹽包PBS緩沖液），3ml/1ml，25支/盒
2	ZJ0612	CLOVER多位泵流操作架, 包括以下部件：1、一個12位操作架。 2、一個空氣泵。3、6個10ml玻璃注射器。4、連接頭和塑料軟管各6個。
3	CNtest9042	CNtest桔霉素標準溶液，100ug/ml，1ml/瓶
4	C546150-U	HPLC Column：Cloversil   Myco-C18, 真菌毒素色譜柱，5μm, 4.6×150mm
5	C546250-U	HPLC Column：Cloversil  Myco-C18, 真菌毒素色譜柱，5μm, 4.6×250mm
6	36020C	Filter Funnel, 65mm塑料漏斗，10 個/包
7	36010	CLOVER一次性塑料燒杯，25個/包
8	31240C	CLOVER折疊槽紋濾紙，100張/盒
9	31955C	CLOVER玻璃微纖微濾紙，100張/盒
10	34000C	CLOVER一次性測試管，250支/盒
11	20202	帶1.1升不銹鋼均質(zhì)杯的均質(zhì)器，220V，可定時
12	YQ-CL200	CLOVER 多管渦旋混勻儀（500-2500轉(zhuǎn)/分鐘）
13	CL-BC9002	9-425進樣瓶蓋包含蓋墊，一字開口，100個/包
14	CL-SB9002	9-425透明進樣瓶，帶刻度，2ml，100只/盒
15	CL-SB9004	9-425棕色進樣瓶，帶刻度，2ml，100只/盒
16	CN13N22	CLOVER有機系針式過濾器φ13, 0.22um，100個/桶
17	CN13M22	CLOVER水系針式過濾器 φ13，0.22um，100個/桶