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親和柱技術(shù)應(yīng)用:紅曲產(chǎn)品中桔青霉素的檢測

瀏覽次數(shù):841 發(fā)布日期:2024-7-29  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
近期,日本有多人在服用小林制藥公司生產(chǎn)的含紅曲成分保健品后因腎臟疾病住院甚至死亡。此事件把日本百年藥企小林制藥,推上了風口浪尖。同時,也讓紅曲再次進入了大眾的視野。
關(guān)于紅曲

紅曲也叫紅曲紅、紅曲霉、紅曲米等,其作為一種天然發(fā)酵產(chǎn)物,其成分相對復(fù)雜,包括多種具有生物活性的物質(zhì)。其用糯米蒸制后接種紅曲菌種,發(fā)酵繁殖的,產(chǎn)品是發(fā)酵后的暗紅色糯米,經(jīng)粉碎后成為紅曲粉。它在食品工業(yè)中應(yīng)用十分廣泛,南方做燒肉或豆腐乳多使用。

同時,紅曲還具有降壓降脂、活血化瘀、健脾消食的功效。在保健品和藥品中也有廣泛應(yīng)用。

1、降壓降脂:紅曲可以降低血液黏稠度,提高血管舒張能力,恢復(fù)血管的彈性,降低血管的外周阻力,促進血壓平穩(wěn)下降。而且紅曲中還含有他汀類物質(zhì),能降脂。所以紅曲具有調(diào)節(jié)血壓、降低血脂的功效。

2、活血化瘀:紅曲可以活血化瘀,主治產(chǎn)后惡露不盡、瘀滯腹痛、跌打損傷。

3、健脾消食:紅曲可以健脾消食,主治飲食停滯、胸膈滿悶、消化不良或赤白下痢。

紅曲的相關(guān)標準:

根據(jù)國家標準GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》及其增補公告,紅曲米及紅曲紅作為著色劑可用于腐乳、碳酸飲料 、果凍、糕點、配制酒等多種食品中,其中風味發(fā)酵乳中的最大使用量不得超過0.8 g/kg,糕點中的使用量不得超過0.9 g/kg,焙烤食品餡料及表面用掛漿不得超過1.0 g/kg,其他允許使用的食品則可根據(jù)生產(chǎn)需要適量使用。

另外鑒于紅曲中桔青霉素的危害,國家也設(shè)定了限量標準,GB 1886.181-2016《食品安全國家標準 食品添加劑 紅曲紅》中規(guī)定紅曲紅中桔青霉素的限量為0.04 mg/kg。

桔青霉素親和柱簡介

參考《GB/T 5009.222-2016 食品安全國家標準食品中桔青霉素的測定》,樣品經(jīng)提取液提取、過濾、稀釋,然后通過鍵合有桔青霉素特殊抗體的免疫親和柱。此時,桔青霉素被親和柱中的抗體特異性吸附,用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去,然后用甲醇使抗體變性,從而將桔青霉素從親和柱上洗脫下來。最后,用HPLC或液質(zhì)方法進行定量檢測。

桔青霉素親和柱規(guī)格:

柱容量:100ng/250ng

包裝:25支/盒,1ml,3ml

保存:2-8℃

保質(zhì)期:18個月

使用對象

本方法適用于紅曲制品、糧食、食品、飼料、調(diào)味品、藥材和酒類等樣品中桔青霉素的測定

實驗溶液制備

1)      提取液,甲醇/水(7+3):取70mL甲醇加30mL水,混合均勻。
2)     pH7.0 PBS溶液:Clover pH7.0 PBS鹽包(貨號:C3001):將鹽包用1000ml純水直接溶解,備用。保質(zhì)期18個月。
3)      0.1%吐溫 20-PBS 溶液:準確移取 1mL 吐溫-20 以pH 7.0 PBS緩沖溶液定容至 1000mL;10倍濃縮0.1%吐溫PBS緩沖液(貨號:G1112-C)直接稀釋10倍使用。
4)      0. 1% 磷酸溶液:準確移取 1mL 磷酸加水定容至 1000mL。
5)      洗脫液 :甲醇-0. 1% 磷酸溶液( 70+30 ) 取70mL甲醇加30mL0. 1% 磷酸溶液( 70+30 ),混合均勻。

樣品前處理:

1、紅曲及其制品:

稱取5g磨細的樣品,置于250mL錐形瓶中,或勻質(zhì)杯中。加入100mL甲醇/水(7+3)溶液。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min。將提取物到入槽紋濾紙或普通濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。移取1mL上步的濾液,置于干凈的容器中。用39 mL pH 7.0 PBS溶液:稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

2、大米,玉米,辣椒等

稱取10g磨細的樣品,置于150mL錐形瓶中,或勻質(zhì)杯中。加入50mL甲醇/水(7+3)溶液。以均質(zhì)器高速勻質(zhì)提取2min。將提取物倒入槽紋濾紙或普通濾紙上,濾液收集于干凈的容器中。移取1mL上步的濾液,置于干凈的容器中。用49 mL pH 7.0 PBS溶液:稀釋,混勻。將上步稀釋液通過玻璃微纖維過濾器,濾液收集于玻璃注射器筒中,量取10mL準備上柱凈化。

親和柱凈化程序:

將上步10 mL濾液,以1滴/秒的流速全部通過免疫親和柱,直至空氣進入到親和柱中。用10 mL pH 7.0 PBS溶液或0.1%吐溫 20-PBS溶液以1-2滴/秒的流速淋洗親和柱。用1mL 洗脫液(甲醇-0. 1% 磷酸溶液70+30)以1 滴/秒的流速淋洗親和柱,將所有樣品洗脫液收集于玻璃測試管中,混勻,注入HPLC檢測。

液相色譜條件:

色譜柱:Cloversil-C18 4.6*150mm(5um)

流速:0.8mL/min

檢測器:熒光檢測器,激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長500nm;

進樣體積:20~100uL

流動相1:0.1%磷酸:乙腈=35:65(V/V)

流動相2:流動相 A 液:乙腈,流動相 B 液:0. 1% 磷酸。

流動相及梯度洗脫條件見表

 

時間 /min

乙腈  /  %

0. 1% 磷酸  /  %

0

40

60

1

40

60

7

90

10

9

90

10

10

40

60

15

40

60

 

實驗圖譜及數(shù)據(jù):

高效液相色譜儀桔青霉素標準品(50ppb)譜圖如下:

紅曲粉樣品加標(2000ppb)譜圖如下:



添加回收實驗數(shù)據(jù)如下:
 

紅曲粉樣品1

紅曲粉樣品2

本底(ppb)

0.00

845

加標2000ppb

2026

2820

回收率

101%

99%

桔霉素檢測全套方案,聯(lián)系客服

檢測桔青霉素產(chǎn)品配置清單:

編號 產(chǎn)品貨號 產(chǎn)品名稱
1 IAC109 CLOVER桔青霉素親和柱(配套鹽包PBS緩沖液),3ml/1ml,25支/盒
2 ZJ0612 CLOVER多位泵流操作架, 包括以下部件:1、一個12位操作架。 2、一個空氣泵。3、6個10ml玻璃注射器。4、連接頭和塑料軟管各6個。
3 CNtest9042 CNtest桔霉素標準溶液,100ug/ml,1ml/瓶
4 C546150-U HPLC Column:Cloversil   Myco-C18, 真菌毒素色譜柱,5μm, 4.6×150mm
5 C546250-U HPLC Column:Cloversil  Myco-C18, 真菌毒素色譜柱,5μm, 4.6×250mm
6 36020C Filter Funnel, 65mm塑料漏斗,10 個/包
7 36010 CLOVER一次性塑料燒杯,25個/包
8 31240C CLOVER折疊槽紋濾紙,100張/盒
9 31955C CLOVER玻璃微纖微濾紙,100張/盒
10 34000C CLOVER一次性測試管,250支/盒
11 20202 帶1.1升不銹鋼均質(zhì)杯的均質(zhì)器,220V,可定時
12 YQ-CL200 CLOVER 多管渦旋混勻儀(500-2500轉(zhuǎn)/分鐘)
13 CL-BC9002 9-425進樣瓶蓋包含蓋墊,一字開口,100個/包
14 CL-SB9002 9-425透明進樣瓶,帶刻度,2ml,100只/盒
15 CL-SB9004 9-425棕色進樣瓶,帶刻度,2ml,100只/盒
16 CN13N22 CLOVER有機系針式過濾器φ13, 0.22um,100個/桶
17 CN13M22 CLOVER水系針式過濾器 φ13,0.22um,100個/桶

 

來源:北京中檢維康生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:400-6677-658/15010301983
E-mail:1609095159@qq.com

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