雜交瘤細胞技術定義、原理詳解
雜交瘤細胞（hybridoma）是一種在制備單克隆抗體過程中，用骨髓瘤細胞和B淋巴細胞融合而成的細胞。雜交瘤細胞一般通過瘤細胞培養(yǎng)來制備。
雜交瘤技術是指兩個或兩個以上細胞合并形成一個細胞的現(xiàn)象。他可使兩個不同來源的細胞核在同一細胞中表達功能。
雜交瘤抗體技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠細胞與小鼠骨髓瘤細胞。脾淋巴細胞的主要特征是它的抗體分泌功能和能夠在選擇培養(yǎng)基中生長，小鼠骨髓瘤細胞則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖，即所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有b細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交細胞才具有持續(xù)增殖的能力，形成同時具備抗體分泌功能和保持細胞永生性兩種特征的細胞，這種雜種細胞叫做雜交瘤細胞。
雜交瘤技術（hybridoma technique）
即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術。它是在體細胞融合技術基礎上發(fā)展起來的�？死眨↘ohler）和米爾斯坦（Milstein）（1975）證明，骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合，形成能分泌針對該抗原的均質(zhì)的高特異性的抗體——單克隆抗體，這種技術通稱為雜交瘤技術。這一技術的基礎是細胞融合技術。骨髓瘤細胞在體外可以連續(xù)傳代，而脾細胞是終末細胞，不能在體外繁殖。如將小鼠的骨髓瘤細胞與分泌某種抗體或因子的淋巴細胞融合，則融合細胞既具有腫瘤細胞無限繁殖的特性，又具有淋巴細胞能分泌特異性抗體或因子的能力，同時也克服了免疫淋巴細胞不能在體外繁殖的缺點，融合的細胞稱為淋巴細胞雜交瘤。
雜交瘤技術基于三種關鍵技術。
一、動物免疫
將特定的抗原注射到哺乳動物（如小鼠）體內(nèi)，在外來抗原刺激下，被免疫動物脾臟內(nèi)的B淋巴細胞大量增殖并且分泌針對于該抗原的特異性抗體。動物免疫的作用就是用特定外來抗原對動物進行免疫，以刺激能分泌特異性抗體的B淋巴細胞大量增殖。
二、細胞融合
B淋巴細胞受外來抗原刺激后可以分泌抗體，但B淋巴細胞本身是一種終末分化細胞，通常不再進行細胞分裂，存活一段時間（兩周）便死亡-短命細胞；而骨髓瘤細胞不分泌抗體，卻能在體外無限增殖存活。如果能將這兩種細胞的特性結(jié)合起來，就能得到既能分泌抗體又能在體外長期存活的細胞，細胞融合雜交瘤細胞中非常關鍵的一個步驟。
三、雜交瘤細胞篩選
篩選雜交瘤細胞一般使用HAT培養(yǎng)基。
HAT培養(yǎng)基篩選方法基本原理：
HAT培養(yǎng)基成分：含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)三種成分。
細胞DNA合成途徑：主要合成和補救合成途徑兩種方式。主要合成就是利用糖和氨基酸在二氫葉酸還原酶的催化下來合成DNA；而補救合成途徑則是通過次嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase， HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase，TK)將核苷酸前體合成核苷酸以供DNA合成原料。
HAT培養(yǎng)基中氯基喋呤是二氫葉酸還原酶的抑制劑，能有效地阻斷DNA合成的內(nèi)源性途徑。融合前的骨髓瘤細胞不能產(chǎn)生抗體，并且缺乏次黃嘌呤 – 鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）基因，使得它們對HAT培養(yǎng)基敏感，阻斷了DNA補救合成途徑。
將融合的細胞在HAT培養(yǎng)基中孵育大約10至14天，未融合的以及自身融合的骨髓瘤細胞死亡。這是因為HAT培養(yǎng)基阻斷了骨髓瘤細胞兩大DNA合成途徑。未融合的以及自身融合的B淋巴細胞雖然能夠合成HGPRT酶，但其是正常細胞，存活一段時間（兩周）也死亡。因此，在HAT養(yǎng)基中，只有B細胞-骨髓瘤雜合體存活，因為雜交瘤細胞繼承了B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的雙重特性，能夠合成HGPRT酶和TK酶。這些雜交瘤細胞能夠分泌抗體（B細胞特性）并且無限增殖（骨髓瘤細胞特性）。
然后將培養(yǎng)基稀釋到多孔板中，使得每個孔僅含有一個雜交瘤細胞。再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株。由于孔中的抗體由相同的B細胞產(chǎn)生，針對相同的抗原表位，所以產(chǎn)生的抗體又被稱之為單克隆抗體。
接下來采用體內(nèi)或者體外方式對篩選的能分泌特異性抗體的雜交瘤細胞進行擴大培養(yǎng)，最后收集提純獲取單抗。
關于雜交瘤細胞技術方法的具體步驟，義翹神州將圍繞動物免疫，細胞融合，雜交瘤篩選，細胞擴大培養(yǎng)和抗體分離等主題詳細分析講解。
同時義翹神州提供：雜交瘤細胞培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)服務和雜交瘤細胞抗體基因測序服務
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service
https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service
想了解更多詳情的朋友可以關注義翹神州官網(wǎng)！
雜交瘤技術是指兩個或兩個以上細胞合并形成一個細胞的現(xiàn)象。他可使兩個不同來源的細胞核在同一細胞中表達功能。
雜交瘤抗體技術的基本原理是通過融合兩種細胞而同時保持兩者的主要特征。這兩種細胞分別是經(jīng)抗原免疫的小鼠細胞與小鼠骨髓瘤細胞。脾淋巴細胞的主要特征是它的抗體分泌功能和能夠在選擇培養(yǎng)基中生長，小鼠骨髓瘤細胞則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖，即所謂永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有b細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交細胞才具有持續(xù)增殖的能力，形成同時具備抗體分泌功能和保持細胞永生性兩種特征的細胞，這種雜種細胞叫做雜交瘤細胞。
雜交瘤技術（hybridoma technique）
即淋巴細胞雜交瘤技術，又稱單克隆抗體技術。它是在體細胞融合技術基礎上發(fā)展起來的�？死眨↘ohler）和米爾斯坦（Milstein）（1975）證明，骨髓瘤細胞與免疫的動物脾細胞融合，形成能分泌針對該抗原的均質(zhì)的高特異性的抗體——單克隆抗體，這種技術通稱為雜交瘤技術。這一技術的基礎是細胞融合技術。骨髓瘤細胞在體外可以連續(xù)傳代，而脾細胞是終末細胞，不能在體外繁殖。如將小鼠的骨髓瘤細胞與分泌某種抗體或因子的淋巴細胞融合，則融合細胞既具有腫瘤細胞無限繁殖的特性，又具有淋巴細胞能分泌特異性抗體或因子的能力，同時也克服了免疫淋巴細胞不能在體外繁殖的缺點，融合的細胞稱為淋巴細胞雜交瘤。
雜交瘤技術基于三種關鍵技術。
一、動物免疫
將特定的抗原注射到哺乳動物（如小鼠）體內(nèi)，在外來抗原刺激下，被免疫動物脾臟內(nèi)的B淋巴細胞大量增殖并且分泌針對于該抗原的特異性抗體。動物免疫的作用就是用特定外來抗原對動物進行免疫，以刺激能分泌特異性抗體的B淋巴細胞大量增殖。
二、細胞融合
B淋巴細胞受外來抗原刺激后可以分泌抗體，但B淋巴細胞本身是一種終末分化細胞，通常不再進行細胞分裂，存活一段時間（兩周）便死亡-短命細胞；而骨髓瘤細胞不分泌抗體，卻能在體外無限增殖存活。如果能將這兩種細胞的特性結(jié)合起來，就能得到既能分泌抗體又能在體外長期存活的細胞，細胞融合雜交瘤細胞中非常關鍵的一個步驟。
三、雜交瘤細胞篩選
篩選雜交瘤細胞一般使用HAT培養(yǎng)基。
HAT培養(yǎng)基篩選方法基本原理：
HAT培養(yǎng)基成分：含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)三種成分。
細胞DNA合成途徑：主要合成和補救合成途徑兩種方式。主要合成就是利用糖和氨基酸在二氫葉酸還原酶的催化下來合成DNA；而補救合成途徑則是通過次嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase， HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase，TK)將核苷酸前體合成核苷酸以供DNA合成原料。
HAT培養(yǎng)基中氯基喋呤是二氫葉酸還原酶的抑制劑，能有效地阻斷DNA合成的內(nèi)源性途徑。融合前的骨髓瘤細胞不能產(chǎn)生抗體，并且缺乏次黃嘌呤 – 鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）基因，使得它們對HAT培養(yǎng)基敏感，阻斷了DNA補救合成途徑。
將融合的細胞在HAT培養(yǎng)基中孵育大約10至14天，未融合的以及自身融合的骨髓瘤細胞死亡。這是因為HAT培養(yǎng)基阻斷了骨髓瘤細胞兩大DNA合成途徑。未融合的以及自身融合的B淋巴細胞雖然能夠合成HGPRT酶，但其是正常細胞，存活一段時間（兩周）也死亡。因此，在HAT養(yǎng)基中，只有B細胞-骨髓瘤雜合體存活，因為雜交瘤細胞繼承了B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的雙重特性，能夠合成HGPRT酶和TK酶。這些雜交瘤細胞能夠分泌抗體（B細胞特性）并且無限增殖（骨髓瘤細胞特性）。
然后將培養(yǎng)基稀釋到多孔板中，使得每個孔僅含有一個雜交瘤細胞。再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株。由于孔中的抗體由相同的B細胞產(chǎn)生，針對相同的抗原表位，所以產(chǎn)生的抗體又被稱之為單克隆抗體。
接下來采用體內(nèi)或者體外方式對篩選的能分泌特異性抗體的雜交瘤細胞進行擴大培養(yǎng)，最后收集提純獲取單抗。
關于雜交瘤細胞技術方法的具體步驟，義翹神州將圍繞動物免疫，細胞融合，雜交瘤篩選，細胞擴大培養(yǎng)和抗體分離等主題詳細分析講解。
同時義翹神州提供：雜交瘤細胞培養(yǎng)及抗體生產(chǎn)服務和雜交瘤細胞抗體基因測序服務
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