Western Blot實驗高效和標準-優(yōu)化封閉、抗體孵育和洗滌流程的操作
從時間成本，金錢成本，以至于感情投入角度來評判，論實驗室常規(guī)的基礎實驗哪一個具備最低的投入產出比，相信大家都會選擇Western Blot實驗 。各位正在科研道路上奮戰(zhàn)或者已經成功打怪升級的同學們細數(shù)一下那些年你做的Western Blot，再數(shù)一下最后發(fā)表文章用到的Western Blot結果圖，相信比例低于1%的不在少數(shù)。
那么緣何Western Blot具有如此低下的投入產出比呢？仔細品品，Western Blot實驗并非是一個非常復雜的實驗，然而影響因素卻極其多，其中有些是可控的，有些是需要經驗判斷的，而有些只是需要留意實驗操作細節(jié)，就能夠做好的。而整個流程中，大家往往會非常重視那些不可感知的實驗條件，通過標準化的流程固定參數(shù)，以減少實驗組和樣品之間的偏差，比如樣品的獲取過程，通常會固定裂解液的種類，用量，時間等等因素；比如電泳過程，通常會固定電壓或電流，并通過預染maker的指示固定電泳的總時間，也可以通過購買預制膠減少電泳膠批次之間的誤差；比如轉膜和曝光，也可固定操作時間盡量減少誤差。但是這其中，最簡單的操作部分，卻往往被忽視了，那就是封閉，洗滌和抗體孵育部分。
諸如上樣，電泳，轉膜，曝光流程，這些步驟的實驗相對比較獨立，不受其他人實驗的干擾，且通常是一次性的步驟，大家往往會遵守嚴格的操作流程。而封閉，洗滌和抗體孵育部分，由于是多次反復的操作，且經常和其他實驗室人員共享搖床平臺，因此往往很難固定一個統(tǒng)一的標準。比如，實驗室很多的簡易搖床并無控制振蕩速度和頻率的按鈕和參數(shù)；比如在封閉或孵育的時候遇到其他人員需要洗滌而對搖床的速度進行了調整，反之亦然；比如洗滌過程中沒有固定洗滌液的體積而是隨意倒入一定的量，甚至有時候倒入洗滌液的時候直接沖擊在膜上；比如多次洗滌的時間間隔不統(tǒng)一，有時候因需要配合其他實驗的安排而延長/縮短洗滌時間，或者增加/減少洗滌次數(shù)等等。由于Western Blot實驗的封閉、洗滌和抗體孵育的效果很大程度上取決于時間，分子擴散，液體交換效率等因素，因此上述各種條件的不統(tǒng)一，綜合下來會影響封閉的效果，抗體結合的效率和特異性，背景的干凈程度。雖然每次實驗都會以內參來衡量不同樣品之間的差異，但是多次實驗之間卻因為以上各種因素的不統(tǒng)一，導致較大的實驗偏差。因此將以上多次反復的簡單操作進行標準化，可極大提高Western Blot的穩(wěn)定性，減少重復次數(shù)。
除此之外，封閉，洗滌和抗體孵育部分也是整個Western Blot中最耗時但卻沒有技術含量的部分，通常這幾個步驟的總時間會占用Western Blot的1/2以上，并且在這期間，需要研究人員時刻待命進行抗體和洗滌液的更換，嚴重影響了進行其他實驗的安排。并且基于以下2個原因，很多人選擇一抗過夜，將Western Blot分成2天之內完成。其中一個原因是擔心抗體的特異性不行，背景高，因此選擇低溫孵育過夜以提高特異結合和降低非特異背景；第二個原因是第一天進行整個Western Blot的實驗流程會導致做到晚上很晚的時間。通常一抗孵育過夜之后，第二天早上進行洗滌，二抗孵育，洗滌，曝光，往往要到中午或者午飯后才能出結果，然后再決定當日是否需要繼續(xù)調整樣品重新進行新一輪的Western Blot實驗，其中留給數(shù)據(jù)分析和思考如何優(yōu)化下一步流程的時間比較少，因此容易陷入未經詳細思考，便倉促進入下一個實驗流程的惡性循環(huán)中。
那么如何解決以上關于封閉，抗體孵育和洗滌這類簡單的重復勞動帶來的對整個Western Blot流程和結果的影響呢？唯一的解決方案就是對這幾個步驟進行標準化和自動化，以減少人工的干預，以及有效利用凌晨的時間。目前市場上推出不少可解決這些問題的小型自動化設備，比如美國Cellagen Technology公司的Flexiwash FW400
FlexiWash FW400自動化免疫雜交系統(tǒng)，實現(xiàn)了對繁瑣耗時的Western blots膜的孵育和洗滌過程的自動化和標準化過程。在蛋白被轉移到雜交膜上之后，可將雜交膜裝載到FlexiWash FW400工作站中進行自動封閉、孵育和洗滌循環(huán)。實驗人員僅需要準備相應體積的試劑，啟動免疫雜交流程，即可讓FlexiWash FW400完成剩下所有的工作，直至曝光前。獨有的液體處理設計，使得FlexiWash FW400支持4批樣品的同時孵育/洗滌，每個樣品可獨立進行編程，互不干擾。
節(jié)約時間和成本
- Load-and-go一鍵調用模板，無人值守的快速孵育和洗滌過程。
- 將人工操作時間降低到幾分鐘，再也不用時時刻刻守著Western blots。
- 自動回收珍貴試劑（比如一抗、二抗、封閉液等）進行重復利用。
- 帶有溫控模塊，可一抗低溫過夜。
高度靈活
- 單個程序可設置多達7步孵育/洗滌流程。
- 每個步驟可編輯當前所需用的試劑來源、體積、孵育/洗滌時間以及循環(huán)次數(shù)。
- 友好的用戶界面：大視野LCD觸摸屏用于編輯程序和顯示狀態(tài)。
- 三種不同規(guī)格尺寸的抗體孵育盒，兼容各種類型、大小的膠和膜。
更好的Western Blot 結果
- 可重復性好：減少了人工操作流程中孵育/洗滌時間和加入液體體積的隨意性。
- 方便優(yōu)化條件：可平行比較4種不同的雜交條件，如：不同的封閉試劑，抗體稀釋度，孵育時間，洗滌次數(shù)等。
通過以上的自動化操作，不僅可以實現(xiàn)對封閉，抗體孵育和洗滌的自動化和標準化，極大釋放科學家的時間，可以專注于數(shù)據(jù)分析，文獻閱讀和更高級的實驗中，并且有效利用晚上和凌晨的時間進行操作，第二天早上到達實驗室后可直接進行曝光和數(shù)據(jù)分析，可以從容地進行第二輪實驗的優(yōu)化設計和實施。
更多詳情請聯(lián)系：
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司
MineBio Life Sciences Ltd.
www.mine-bio.com
Tel: +(86) 21 51769110
Mobile: +(86) 18221705797（微信同號）
QQ：3117358847
Email: info@mine-bio.com
地址: 上海浦東張江達爾文路 88 號 21 號樓 4 層
