選擇MTT、CCK-8試劑盒的原理和方法

瀏覽次數(shù)：2372　發(fā)布日期：2019-12-27　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

MTT、CCK-8試劑盒，我該pick哪一種？

MTT、CCK-8試劑盒是進行細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測的常用試劑盒，在進行實驗時應(yīng)該如何從兩種試劑盒中進行選擇呢？跟“星博士”一起看看這兩種試劑盒的具體介紹吧！

一、原理介紹：

MTT試劑盒中含有MTT（化學(xué)名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽），外源性MTT能夠被活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原為深紫色結(jié)晶甲瓚，該產(chǎn)物不溶于水，會沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。加入特定溶劑后，甲瓚可以被完全溶解，然后通過酶標(biāo)儀測定490 nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，對應(yīng)的吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，對應(yīng)的吸光度越低。

CCK-8（Cell Counting Kit-8）試劑盒廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測。本試劑中含有WST-8（化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑單鈉鹽），是一種類似于MTT的化合物，它在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在條件下，可被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原為橙色甲瓚產(chǎn)物Formazan，該產(chǎn)物具有高度水溶性，生成的Formazan數(shù)量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。檢測速度快且靈敏度高于任何其它四唑鹽，如MTT、XTT或MTS。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。

二、優(yōu)勢介紹：

MTT配制過程需避光、無菌，且MTT比較難溶，需振蕩器混勻，配置過程麻煩。MTT試劑盒中是已配制好的組分，實驗過程中直接添加即可。與CCK8試劑盒相比，性價比更高。

序號	組分	500T CT0002
1	MTT溶液	5 mL
2	Formazan溶解液	60 mL

CCK-8試劑盒，不需配制，無需換液，步驟便捷，靈敏度高。同MTT相比對細(xì)胞無明顯毒性，一般狀況下對細(xì)胞形態(tài)沒有明顯的改變，因此加入CCK-8溶液顯色后，可選擇不同時間點反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，找到實驗最佳測定時間。

序號	組分	100T CT0001-A	500T CT0001-B
1	CCK-8溶液	1 mL	5 mL

三、注意事項：

1、試劑使用前，注意檢查是否已完全解凍，必須在完全溶解并混勻后使用。

2、使用96孔板進行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意液體蒸發(fā)。96孔板外圍一圈最容易蒸發(fā)，可以棄用外圍一圈，改加PBS、水或培養(yǎng)液。也可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以減緩蒸發(fā)。

3、最終進行細(xì)胞存活率等計算時，需要扣除本底的吸光度，因此要注意進行空白孔的設(shè)置。

4、操作時注意不要產(chǎn)生氣泡，在最終讀板時注意檢查孔內(nèi)是否有氣泡。氣泡會影響測定結(jié)果，可通過輕敲混勻的方式進行消除。

那么，到底應(yīng)該如何進行選擇呢？敲黑板，劃重點：

1、如果對細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性的檢測要求不高，建議選擇性價比更高的MTT試劑盒；

2、如果要求較高的檢測靈敏度，建議選擇靈敏度高的CCK-8試劑盒；

3、進行大批量樣品檢測時，建議選擇CCK-8試劑盒，因為CCK-8試劑盒操作更便捷；

4、如果細(xì)胞毒性要求比較嚴(yán)格，建議選擇CCK-8試劑盒，因為CCK-8試劑盒對細(xì)胞無明顯毒性，一般情況下對細(xì)胞形態(tài)沒有明顯的改變；

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